畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2010年
8期
1006-1011
,共6页
吕敏娜%覃宗华%袁建峰%孙铭飞%余劲术%吴彩艳%蔡建平
呂敏娜%覃宗華%袁建峰%孫銘飛%餘勁術%吳綵豔%蔡建平
려민나%담종화%원건봉%손명비%여경술%오채염%채건평
鸭疫里默氏菌%甲羟戊酸激酶%表达%免疫保护
鴨疫裏默氏菌%甲羥戊痠激酶%錶達%免疫保護
압역리묵씨균%갑간무산격매%표체%면역보호
在从鸭疫里默氏菌(RA)基因组文库筛选毒力基因的过程中,作者获得了编码RA甲羟戊酸激酶的基因(RAMVA),将该基因片段提交GenBank,收录号为GQ398751.测序分析结果显示其开放阅读框长492 bp,共编码163个氨基酸.根据序列信息设计引物,用PCR方法从RA中扩增出RAMVA的编码区并与表达质粒pMAL-C2X连接,构建重组质粒pMAL-RAMVA.经限制性酶切和序列测序鉴定序列正确无误后将pMAL-RAMVA转化至E.coli BL21(DE3)构建重组表达菌E.coli BL21/pMAL-C2X-RAMVA.用IPTG诱导重组菌成功诱导RAMVA的表达,通过SDS-PAGE分析表达产物,表达量占全菌总蛋白的15.6%,且重组表达的甲羟戊酸激酶在大肠杆菌中表达时以可溶性状态存在.雏鸭免疫试验表明,接种重组表达菌E.coli BL21/pMAL-C2X-RAMVA 2周后,可产生对RA致死量攻击达42.3%的免疫保护率.
在從鴨疫裏默氏菌(RA)基因組文庫篩選毒力基因的過程中,作者穫得瞭編碼RA甲羥戊痠激酶的基因(RAMVA),將該基因片段提交GenBank,收錄號為GQ398751.測序分析結果顯示其開放閱讀框長492 bp,共編碼163箇氨基痠.根據序列信息設計引物,用PCR方法從RA中擴增齣RAMVA的編碼區併與錶達質粒pMAL-C2X連接,構建重組質粒pMAL-RAMVA.經限製性酶切和序列測序鑒定序列正確無誤後將pMAL-RAMVA轉化至E.coli BL21(DE3)構建重組錶達菌E.coli BL21/pMAL-C2X-RAMVA.用IPTG誘導重組菌成功誘導RAMVA的錶達,通過SDS-PAGE分析錶達產物,錶達量佔全菌總蛋白的15.6%,且重組錶達的甲羥戊痠激酶在大腸桿菌中錶達時以可溶性狀態存在.雛鴨免疫試驗錶明,接種重組錶達菌E.coli BL21/pMAL-C2X-RAMVA 2週後,可產生對RA緻死量攻擊達42.3%的免疫保護率.
재종압역리묵씨균(RA)기인조문고사선독력기인적과정중,작자획득료편마RA갑간무산격매적기인(RAMVA),장해기인편단제교GenBank,수록호위GQ398751.측서분석결과현시기개방열독광장492 bp,공편마163개안기산.근거서렬신식설계인물,용PCR방법종RA중확증출RAMVA적편마구병여표체질립pMAL-C2X련접,구건중조질립pMAL-RAMVA.경한제성매절화서렬측서감정서렬정학무오후장pMAL-RAMVA전화지E.coli BL21(DE3)구건중조표체균E.coli BL21/pMAL-C2X-RAMVA.용IPTG유도중조균성공유도RAMVA적표체,통과SDS-PAGE분석표체산물,표체량점전균총단백적15.6%,차중조표체적갑간무산격매재대장간균중표체시이가용성상태존재.추압면역시험표명,접충중조표체균E.coli BL21/pMAL-C2X-RAMVA 2주후,가산생대RA치사량공격체42.3%적면역보호솔.
