生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2012年
2期
107-111
,共5页
ldh基因%基因敲除%谷氨酸棒杆菌%荧光定量PCR
ldh基因%基因敲除%穀氨痠棒桿菌%熒光定量PCR
ldh기인%기인고제%곡안산봉간균%형광정량PCR
谷氨酸棒杆菌中ldh基因编码乳酸脱氢酶,可催化丙酮酸转化生成乳酸.利用重叠延伸PCR的方法,获得中间缺失部分序列的dldh基因片段,将其与载体pk 18mobsacB连接,转化大肠杆菌感受态,筛选出阳性转化子后,转化谷氨酸棒杆菌ATCC 13032感受态细胞.分别在卡那霉素抗性平板及10％蔗糖平板上进行两次筛选,利用PCR方法鉴定,成功获得ldh基因缺失的谷氨酸棒杆菌突变株ATCC 13032-(4)ldh.应用荧光定量PCR检测,ATCC 13032-(z)ldh中的ldh基因在转录水平与野生型菌株ATCC 13032相比,相对表达量为O.ldh基因的敲除对菌株的生长造成了一定的影响.
穀氨痠棒桿菌中ldh基因編碼乳痠脫氫酶,可催化丙酮痠轉化生成乳痠.利用重疊延伸PCR的方法,穫得中間缺失部分序列的dldh基因片段,將其與載體pk 18mobsacB連接,轉化大腸桿菌感受態,篩選齣暘性轉化子後,轉化穀氨痠棒桿菌ATCC 13032感受態細胞.分彆在卡那黴素抗性平闆及10％蔗糖平闆上進行兩次篩選,利用PCR方法鑒定,成功穫得ldh基因缺失的穀氨痠棒桿菌突變株ATCC 13032-(4)ldh.應用熒光定量PCR檢測,ATCC 13032-(z)ldh中的ldh基因在轉錄水平與野生型菌株ATCC 13032相比,相對錶達量為O.ldh基因的敲除對菌株的生長造成瞭一定的影響.
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