河南农业科学
河南農業科學
하남농업과학
JOURNAL OF HENAN AGRICULTURAL SCIENCES
2012年
5期
137-140,144
,共5页
王蕊%张改平%乔松林%刘永晖%蒋志政%万博%鲍登克%王爱萍
王蕊%張改平%喬鬆林%劉永暉%蔣誌政%萬博%鮑登剋%王愛萍
왕예%장개평%교송림%류영휘%장지정%만박%포등극%왕애평
猪%实时荧光定量PCR%IFN-β基因%IRF-3基因
豬%實時熒光定量PCR%IFN-β基因%IRF-3基因
저%실시형광정량PCR%IFN-β기인%IRF-3기인
为建立猪IFN-β及IRF-3基因实时荧光定量PCR检测方法,依据GenBank中IFN-β和IRF-3基因的保守序列,设计并合成各自特异性引物,并以β-actin为内参基因,采用SYBRGreen-Ⅰ为染料,建立实时荧光定量检测方法.提取猪肺泡巨噬细胞总RNA,经反转录得cDNA,用特异性引物经PCR扩增得到IFN-β和IRF-3基因,将其克隆至pMD-19T载体,经测序鉴定后得重组质粒,依次10倍稀释做为标准品,建立标准曲线及溶解曲线.结果表明,β3-actin基因、IFN-β基因和IRF-3基因标准曲线线性关系较好,R2≥0.997；溶解曲线为特异性单峰,无非特异性扩增,检测下限可达100个拷贝/μL.建立的猪IFN-β和IRF-3基因实时荧光定量RT-PCR检测方法,特异性强、重复性好,为从分子水平上研究猪的免疫应答奠定了基础.
為建立豬IFN-β及IRF-3基因實時熒光定量PCR檢測方法,依據GenBank中IFN-β和IRF-3基因的保守序列,設計併閤成各自特異性引物,併以β-actin為內參基因,採用SYBRGreen-Ⅰ為染料,建立實時熒光定量檢測方法.提取豬肺泡巨噬細胞總RNA,經反轉錄得cDNA,用特異性引物經PCR擴增得到IFN-β和IRF-3基因,將其剋隆至pMD-19T載體,經測序鑒定後得重組質粒,依次10倍稀釋做為標準品,建立標準麯線及溶解麯線.結果錶明,β3-actin基因、IFN-β基因和IRF-3基因標準麯線線性關繫較好,R2≥0.997；溶解麯線為特異性單峰,無非特異性擴增,檢測下限可達100箇拷貝/μL.建立的豬IFN-β和IRF-3基因實時熒光定量RT-PCR檢測方法,特異性彊、重複性好,為從分子水平上研究豬的免疫應答奠定瞭基礎.
위건립저IFN-β급IRF-3기인실시형광정량PCR검측방법,의거GenBank중IFN-β화IRF-3기인적보수서렬,설계병합성각자특이성인물,병이β-actin위내삼기인,채용SYBRGreen-Ⅰ위염료,건립실시형광정량검측방법.제취저폐포거서세포총RNA,경반전록득cDNA,용특이성인물경PCR확증득도IFN-β화IRF-3기인,장기극륭지pMD-19T재체,경측서감정후득중조질립,의차10배희석주위표준품,건립표준곡선급용해곡선.결과표명,β3-actin기인、IFN-β기인화IRF-3기인표준곡선선성관계교호,R2≥0.997；용해곡선위특이성단봉,무비특이성확증,검측하한가체100개고패/μL.건립적저IFN-β화IRF-3기인실시형광정량RT-PCR검측방법,특이성강、중복성호,위종분자수평상연구저적면역응답전정료기출.
