浙江大学学报（工学版）
浙江大學學報（工學版）
절강대학학보（공학판）
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY(ENGINEERING SCIENCE)
2005年
5期
751-755
,共5页
龚兴国%于红%徐飞虎%谭皓思
龔興國%于紅%徐飛虎%譚皓思
공흥국%우홍%서비호%담호사
绿色荧光蛋白%单链抗体%原核表达系统
綠色熒光蛋白%單鏈抗體%原覈錶達繫統
록색형광단백%단련항체%원핵표체계통
从具有高效蛋白表达及活力的抗肺癌杂交瘤单克隆细胞株(LC-1)抽提总RNA,反转录成cDNA.根据肿瘤单链抗体(ScFv)基因设计引物,用多聚酶链式反应(PCR)克隆出抗体的重链和轻链基因,并通过重叠延伸PCR法将重链基因与修饰后的轻链基因连接为单链抗体基因.改造后的ScFv与绿色荧光蛋白(GFP)基因连接,构建表达质粒ProGFP-ScFv,随后转化大肠杆菌JMl09,用诱导剂IPTG进行诱导表达.表达产物采用Ni-NTA树脂进行纯化,进行SDS-PAGE电泳分析其纯度.酶联免疫检测(ELISA)表明该蛋白已具有抗体活性.395 nm激光激发显示绿色荧光,表明目的基因在原核生物中存在表达.
從具有高效蛋白錶達及活力的抗肺癌雜交瘤單剋隆細胞株(LC-1)抽提總RNA,反轉錄成cDNA.根據腫瘤單鏈抗體(ScFv)基因設計引物,用多聚酶鏈式反應(PCR)剋隆齣抗體的重鏈和輕鏈基因,併通過重疊延伸PCR法將重鏈基因與脩飾後的輕鏈基因連接為單鏈抗體基因.改造後的ScFv與綠色熒光蛋白(GFP)基因連接,構建錶達質粒ProGFP-ScFv,隨後轉化大腸桿菌JMl09,用誘導劑IPTG進行誘導錶達.錶達產物採用Ni-NTA樹脂進行純化,進行SDS-PAGE電泳分析其純度.酶聯免疫檢測(ELISA)錶明該蛋白已具有抗體活性.395 nm激光激髮顯示綠色熒光,錶明目的基因在原覈生物中存在錶達.
종구유고효단백표체급활력적항폐암잡교류단극륭세포주(LC-1)추제총RNA,반전록성cDNA.근거종류단련항체(ScFv)기인설계인물,용다취매련식반응(PCR)극륭출항체적중련화경련기인,병통과중첩연신PCR법장중련기인여수식후적경련기인련접위단련항체기인.개조후적ScFv여록색형광단백(GFP)기인련접,구건표체질립ProGFP-ScFv,수후전화대장간균JMl09,용유도제IPTG진행유도표체.표체산물채용Ni-NTA수지진행순화,진행SDS-PAGE전영분석기순도.매련면역검측(ELISA)표명해단백이구유항체활성.395 nm격광격발현시록색형광,표명목적기인재원핵생물중존재표체.
