农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2010年
4期
788-792
,共5页
赵婧婧%王爽%王琦%梅汝鸿
趙婧婧%王爽%王琦%梅汝鴻
조청청%왕상%왕기%매여홍
多粘类芽胞杆菌%蜡样芽胞杆菌%启动子%gfp标记
多粘類芽胞桿菌%蠟樣芽胞桿菌%啟動子%gfp標記
다점류아포간균%사양아포간균%계동자%gfp표기
应用启动子探针载体pECE7,从多粘类芽胞杆菌(Panebacillus polymyxa)菌株M-1基因组克隆到一系列启动子活性片段,通过氯霉素(chloramphenicol chloromycetin,Cm)浓度梯度筛选出Cm抗性较强的3个片段.将这3个具有启动子活性的片段与来自GFP表达载体pGFP78的gfpmut3a基因插入Escherichia coli-Bacillus穿梭载体pHY300PLY中,获得GFP表达载体pGFP5,pGFP8和pGFP17.通过热激转化E.coli DH5α,荧光显微镜下观察到明亮的绿色荧光,表明筛选到的启动子片段具有良好的启动外源基因gfp转录的功能.同时利用此表达载体标记本实验筛选得到的生防蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)菌株B905,获得了GFP标记的工程菌Bacillus cereus B905(gfp-5、gfp-8和gfp-17),通过荧光显微镜观察,发现转入GFP表达载体pGFP5和pGFP8后,菌体有明亮的绿色荧光,而转入pGFP17的菌体荧光相对较弱.
應用啟動子探針載體pECE7,從多粘類芽胞桿菌(Panebacillus polymyxa)菌株M-1基因組剋隆到一繫列啟動子活性片段,通過氯黴素(chloramphenicol chloromycetin,Cm)濃度梯度篩選齣Cm抗性較彊的3箇片段.將這3箇具有啟動子活性的片段與來自GFP錶達載體pGFP78的gfpmut3a基因插入Escherichia coli-Bacillus穿梭載體pHY300PLY中,穫得GFP錶達載體pGFP5,pGFP8和pGFP17.通過熱激轉化E.coli DH5α,熒光顯微鏡下觀察到明亮的綠色熒光,錶明篩選到的啟動子片段具有良好的啟動外源基因gfp轉錄的功能.同時利用此錶達載體標記本實驗篩選得到的生防蠟樣芽胞桿菌(Bacillus cereus)菌株B905,穫得瞭GFP標記的工程菌Bacillus cereus B905(gfp-5、gfp-8和gfp-17),通過熒光顯微鏡觀察,髮現轉入GFP錶達載體pGFP5和pGFP8後,菌體有明亮的綠色熒光,而轉入pGFP17的菌體熒光相對較弱.
응용계동자탐침재체pECE7,종다점류아포간균(Panebacillus polymyxa)균주M-1기인조극륭도일계렬계동자활성편단,통과록매소(chloramphenicol chloromycetin,Cm)농도제도사선출Cm항성교강적3개편단.장저3개구유계동자활성적편단여래자GFP표체재체pGFP78적gfpmut3a기인삽입Escherichia coli-Bacillus천사재체pHY300PLY중,획득GFP표체재체pGFP5,pGFP8화pGFP17.통과열격전화E.coli DH5α,형광현미경하관찰도명량적록색형광,표명사선도적계동자편단구유량호적계동외원기인gfp전록적공능.동시이용차표체재체표기본실험사선득도적생방사양아포간균(Bacillus cereus)균주B905,획득료GFP표기적공정균Bacillus cereus B905(gfp-5、gfp-8화gfp-17),통과형광현미경관찰,발현전입GFP표체재체pGFP5화pGFP8후,균체유명량적록색형광,이전입pGFP17적균체형광상대교약.
