中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2010年
7期
663-667
,共5页
吉坤美%刘晓宇%唐艳%詹政科%刘志刚
吉坤美%劉曉宇%唐豔%詹政科%劉誌剛
길곤미%류효우%당염%첨정과%류지강
尘螨过敏原%Der f 2%单克隆抗体%夹心ELISA
塵螨過敏原%Der f 2%單剋隆抗體%夾心ELISA
진만과민원%Der f 2%단극륭항체%협심ELISA
目的 研制粉尘螨Ⅱ组变应原Derf 2单克隆抗体(Monoclonal Antibody, McAb),并建立双单抗夹心ELISA检测方法,测定标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中Der f 2的含量.方法 应用基因工程方法获得粉尘螨变应原Der f 2重组蛋白并通过亲和层析纯化,再免疫小鼠,利用间接ELISA筛选获得McAb杂交瘤细胞株并纯化、鉴定抗体的特异性;用一株单抗包被酶标板,同时用生物素标记另一株单抗,从而建立双单抗体夹心ELISA法;并用此法测定粉尘螨变应原脱敏疫苗中Der f 2的含量.结果 成功地获得了一株单抗3B12与屋尘螨抗原具有交叉反应,另外一株单抗3G7与屋尘螨抗原没有交叉反应,并建立了双单抗夹心ELISA 方法测定Der f 2的含量,其方法的检测限为0.5ng/mL,并在6.25ng/mL-300ng/mL范围内线性良好;标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中Der f 2的含量为100ng/10000BAU.结论 成功制备了高效价抗Der f 2 单抗,并建立了双抗体夹心ELISA检测方法.该方法具有很高的灵敏度,可以测定标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中主要变应原Der f 2含量,为临床应用奠定基础.
目的 研製粉塵螨Ⅱ組變應原Derf 2單剋隆抗體(Monoclonal Antibody, McAb),併建立雙單抗夾心ELISA檢測方法,測定標準化粉塵螨變應原脫敏疫苗中Der f 2的含量.方法 應用基因工程方法穫得粉塵螨變應原Der f 2重組蛋白併通過親和層析純化,再免疫小鼠,利用間接ELISA篩選穫得McAb雜交瘤細胞株併純化、鑒定抗體的特異性;用一株單抗包被酶標闆,同時用生物素標記另一株單抗,從而建立雙單抗體夾心ELISA法;併用此法測定粉塵螨變應原脫敏疫苗中Der f 2的含量.結果 成功地穫得瞭一株單抗3B12與屋塵螨抗原具有交扠反應,另外一株單抗3G7與屋塵螨抗原沒有交扠反應,併建立瞭雙單抗夾心ELISA 方法測定Der f 2的含量,其方法的檢測限為0.5ng/mL,併在6.25ng/mL-300ng/mL範圍內線性良好;標準化粉塵螨變應原脫敏疫苗中Der f 2的含量為100ng/10000BAU.結論 成功製備瞭高效價抗Der f 2 單抗,併建立瞭雙抗體夾心ELISA檢測方法.該方法具有很高的靈敏度,可以測定標準化粉塵螨變應原脫敏疫苗中主要變應原Der f 2含量,為臨床應用奠定基礎.
목적 연제분진만Ⅱ조변응원Derf 2단극륭항체(Monoclonal Antibody, McAb),병건립쌍단항협심ELISA검측방법,측정표준화분진만변응원탈민역묘중Der f 2적함량.방법 응용기인공정방법획득분진만변응원Der f 2중조단백병통과친화층석순화,재면역소서,이용간접ELISA사선획득McAb잡교류세포주병순화、감정항체적특이성;용일주단항포피매표판,동시용생물소표기령일주단항,종이건립쌍단항체협심ELISA법;병용차법측정분진만변응원탈민역묘중Der f 2적함량.결과 성공지획득료일주단항3B12여옥진만항원구유교차반응,령외일주단항3G7여옥진만항원몰유교차반응,병건립료쌍단항협심ELISA 방법측정Der f 2적함량,기방법적검측한위0.5ng/mL,병재6.25ng/mL-300ng/mL범위내선성량호;표준화분진만변응원탈민역묘중Der f 2적함량위100ng/10000BAU.결론 성공제비료고효개항Der f 2 단항,병건립료쌍항체협심ELISA검측방법.해방법구유흔고적령민도,가이측정표준화분진만변응원탈민역묘중주요변응원Der f 2함량,위림상응용전정기출.
