中国畜牧兽医
中國畜牧獸醫
중국축목수의
CHINA ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2012年
2期
6-10
,共5页
贺艳芬%徐源%吴海娥%张爱玲%李加琪
賀豔芬%徐源%吳海娥%張愛玲%李加琪
하염분%서원%오해아%장애령%리가기
荚膜红细菌%SQR基因%基因克隆%原核表达%生物活性
莢膜紅細菌%SQR基因%基因剋隆%原覈錶達%生物活性
협막홍세균%SQR기인%기인극륭%원핵표체%생물활성
为获得有活性的硫化物醌还原酶(sulfide-quinone reductase,SQR)并研究其功能,试验利用常规PCR方法从荚膜红细菌(Rhodobacter ca psulatus)中克隆了SQR基因全长CDS区1284 bp;成功构建了SQR基因的原核表达载体pRSETA-SQR,并转入大肠杆菌中进行诱导表达.SDS-PAGE和Western blotting结果显示,SQR融合蛋白成功表达,在37℃条件下,0.4 mmoL/L IPTG诱导表达6h,50 ku的SQR融合蛋白表达量最高.可溶性分析结果表明,SQR重组蛋白以包涵体形式存在,经过纯化、复性后得到较高纯度的SQR活性蛋白.蛋白活性分析结果表明,该酶具有明显的消化底物decyl-UQ的能力,测定其酶活Km值约为4.
為穫得有活性的硫化物醌還原酶(sulfide-quinone reductase,SQR)併研究其功能,試驗利用常規PCR方法從莢膜紅細菌(Rhodobacter ca psulatus)中剋隆瞭SQR基因全長CDS區1284 bp;成功構建瞭SQR基因的原覈錶達載體pRSETA-SQR,併轉入大腸桿菌中進行誘導錶達.SDS-PAGE和Western blotting結果顯示,SQR融閤蛋白成功錶達,在37℃條件下,0.4 mmoL/L IPTG誘導錶達6h,50 ku的SQR融閤蛋白錶達量最高.可溶性分析結果錶明,SQR重組蛋白以包涵體形式存在,經過純化、複性後得到較高純度的SQR活性蛋白.蛋白活性分析結果錶明,該酶具有明顯的消化底物decyl-UQ的能力,測定其酶活Km值約為4.
위획득유활성적류화물곤환원매(sulfide-quinone reductase,SQR)병연구기공능,시험이용상규PCR방법종협막홍세균(Rhodobacter ca psulatus)중극륭료SQR기인전장CDS구1284 bp;성공구건료SQR기인적원핵표체재체pRSETA-SQR,병전입대장간균중진행유도표체.SDS-PAGE화Western blotting결과현시,SQR융합단백성공표체,재37℃조건하,0.4 mmoL/L IPTG유도표체6h,50 ku적SQR융합단백표체량최고.가용성분석결과표명,SQR중조단백이포함체형식존재,경과순화、복성후득도교고순도적SQR활성단백.단백활성분석결과표명,해매구유명현적소화저물decyl-UQ적능력,측정기매활Km치약위4.
