第一军医大学学报
第一軍醫大學學報
제일군의대학학보
JOURNAL OF FIRST MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2003年
2期
106-109,113
,共5页
汤习锋%周东耀%徐智民%周晓东
湯習鋒%週東耀%徐智民%週曉東
탕습봉%주동요%서지민%주효동
肝细胞集落%细胞分裂%肝细胞生长因子%二甲亚砜%烟酰胺
肝細胞集落%細胞分裂%肝細胞生長因子%二甲亞砜%煙酰胺
간세포집락%세포분렬%간세포생장인자%이갑아풍%연선알
目的研究建立体外培养肝细胞集落的关键条件,探讨肝细胞克隆生长的调控机制.方法采用原位预灌流和胶原酶循环灌流分离肝细胞,观察在化学限定培养条件下,肝细胞生长素(HPN)、二甲亚砜(DMSO)及尼克酰胺(NA)对肝细胞DNA合成、有丝分裂象、光镜形态和电镜超微结构的影响.结果肝细胞培养时间进程显示:10 mmo1/LNA显著协同HPN促进肝细胞3H-TdR掺入作用,在60和84 h出现2个DNA合成峰;2%DMSO抑制3H-TdR掺入,但在NA共同作用下,肝细胞在132 h表现为DNA合成峰.有丝分裂象显示:HPN+NA+DMSO培养72 h时肝细胞为正常二级分裂,168h后仍保持相当的有丝分裂活性.光镜下形态及电镜超微结构观察到培养28d的肝细胞克隆生长特征及增殖潜在性.结论NA及DMSO加入-移除方案可交叉控制HPN作用的肝细胞增殖,所构建的肝细胞克隆生长系统可用于人肝细胞代谢、诱变、细胞中毒及生物转化等研究,并为实施体外克隆肝细胞治疗肝衰竭及遗传性肝疾病提供实验依据.
目的研究建立體外培養肝細胞集落的關鍵條件,探討肝細胞剋隆生長的調控機製.方法採用原位預灌流和膠原酶循環灌流分離肝細胞,觀察在化學限定培養條件下,肝細胞生長素(HPN)、二甲亞砜(DMSO)及尼剋酰胺(NA)對肝細胞DNA閤成、有絲分裂象、光鏡形態和電鏡超微結構的影響.結果肝細胞培養時間進程顯示:10 mmo1/LNA顯著協同HPN促進肝細胞3H-TdR摻入作用,在60和84 h齣現2箇DNA閤成峰;2%DMSO抑製3H-TdR摻入,但在NA共同作用下,肝細胞在132 h錶現為DNA閤成峰.有絲分裂象顯示:HPN+NA+DMSO培養72 h時肝細胞為正常二級分裂,168h後仍保持相噹的有絲分裂活性.光鏡下形態及電鏡超微結構觀察到培養28d的肝細胞剋隆生長特徵及增殖潛在性.結論NA及DMSO加入-移除方案可交扠控製HPN作用的肝細胞增殖,所構建的肝細胞剋隆生長繫統可用于人肝細胞代謝、誘變、細胞中毒及生物轉化等研究,併為實施體外剋隆肝細胞治療肝衰竭及遺傳性肝疾病提供實驗依據.
목적연구건입체외배양간세포집락적관건조건,탐토간세포극륭생장적조공궤제.방법채용원위예관류화효원매순배관류분리간세포,관찰재화학한정배양조건하,간세포생장소(HPN)、이갑아풍(DMSO)급니극선알(NA)대간세포DNA합성、유사분렬상、광경형태화전경초미결구적영향.결과간세포배양시간진정현시:10 mmo1/LNA현저협동HPN촉진간세포3H-TdR참입작용,재60화84 h출현2개DNA합성봉;2%DMSO억제3H-TdR참입,단재NA공동작용하,간세포재132 h표현위DNA합성봉.유사분렬상현시:HPN+NA+DMSO배양72 h시간세포위정상이급분렬,168h후잉보지상당적유사분렬활성.광경하형태급전경초미결구관찰도배양28d적간세포극륭생장특정급증식잠재성.결론NA급DMSO가입-이제방안가교차공제HPN작용적간세포증식,소구건적간세포극륭생장계통가용우인간세포대사、유변、세포중독급생물전화등연구,병위실시체외극륭간세포치료간쇠갈급유전성간질병제공실험의거.
