解剖学报
解剖學報
해부학보
ACTA ANATOMICA SINICA
2004年
4期
396-400
,共5页
祁雅慧%王雅梅%孙丽翠%滕旭%闫豫东%司杨%武文琦%邴国英
祁雅慧%王雅梅%孫麗翠%滕旭%閆豫東%司楊%武文琦%邴國英
기아혜%왕아매%손려취%등욱%염예동%사양%무문기%병국영
血管内皮细胞生长因子%基因克隆%基因表达
血管內皮細胞生長因子%基因剋隆%基因錶達
혈관내피세포생장인자%기인극륭%기인표체
目的克隆人血管内皮细胞生长因子165(VEGF165)基因,构建真核表达载体,观察其对脐静脉内皮细胞的增殖作用和血管新生的影响. 方法利用RT-PCR方法,从人扁桃体组织中扩增人VEGF165cDNA完整编码区,并构建成pcDNA3.1(+)/VEGF165(简称pcDNA/V)重组体;应用脂质体介导的基因转移技术将构建的真核表达载体pcDNA/V体外转染至人脐静脉内皮细胞(HUVEC),MTT法检测其对内皮细胞增殖的影响.建立家兔下肢缺血模型,注射重组质粒pcDNA/V,pcDNA3.1(+)空质粒作对照,选取不同时间点,行血管造影. 结果构建的真核表达载体pcDNA/V的酶切电泳分析和测序表明结果正确.pcDNA/V转染HUVEC能明显促进内皮细胞的分裂增殖.血管造影显示,术后基因治疗组远端动脉充盈早于对照组,新生血管数目也明显多于同时期对照组. 结论成功克隆了人VEGF165基因,构建了其真核表达载体.体内外生物学活性研究证实,重组质粒的表达产物具有刺激HUVEC增殖和促进缺血肢体侧枝循环建立的功能.
目的剋隆人血管內皮細胞生長因子165(VEGF165)基因,構建真覈錶達載體,觀察其對臍靜脈內皮細胞的增殖作用和血管新生的影響. 方法利用RT-PCR方法,從人扁桃體組織中擴增人VEGF165cDNA完整編碼區,併構建成pcDNA3.1(+)/VEGF165(簡稱pcDNA/V)重組體;應用脂質體介導的基因轉移技術將構建的真覈錶達載體pcDNA/V體外轉染至人臍靜脈內皮細胞(HUVEC),MTT法檢測其對內皮細胞增殖的影響.建立傢兔下肢缺血模型,註射重組質粒pcDNA/V,pcDNA3.1(+)空質粒作對照,選取不同時間點,行血管造影. 結果構建的真覈錶達載體pcDNA/V的酶切電泳分析和測序錶明結果正確.pcDNA/V轉染HUVEC能明顯促進內皮細胞的分裂增殖.血管造影顯示,術後基因治療組遠耑動脈充盈早于對照組,新生血管數目也明顯多于同時期對照組. 結論成功剋隆瞭人VEGF165基因,構建瞭其真覈錶達載體.體內外生物學活性研究證實,重組質粒的錶達產物具有刺激HUVEC增殖和促進缺血肢體側枝循環建立的功能.
목적극륭인혈관내피세포생장인자165(VEGF165)기인,구건진핵표체재체,관찰기대제정맥내피세포적증식작용화혈관신생적영향. 방법이용RT-PCR방법,종인편도체조직중확증인VEGF165cDNA완정편마구,병구건성pcDNA3.1(+)/VEGF165(간칭pcDNA/V)중조체;응용지질체개도적기인전이기술장구건적진핵표체재체pcDNA/V체외전염지인제정맥내피세포(HUVEC),MTT법검측기대내피세포증식적영향.건립가토하지결혈모형,주사중조질립pcDNA/V,pcDNA3.1(+)공질립작대조,선취불동시간점,행혈관조영. 결과구건적진핵표체재체pcDNA/V적매절전영분석화측서표명결과정학.pcDNA/V전염HUVEC능명현촉진내피세포적분렬증식.혈관조영현시,술후기인치료조원단동맥충영조우대조조,신생혈관수목야명현다우동시기대조조. 결론성공극륭료인VEGF165기인,구건료기진핵표체재체.체내외생물학활성연구증실,중조질립적표체산물구유자격HUVEC증식화촉진결혈지체측지순배건립적공능.
