中国实验动物学报
中國實驗動物學報
중국실험동물학보
ACTA LABORATORIUM ANIMALIS SCIENTIA SINICA
2005年
1期
7-10
,共4页
多海刚%赵铁柱%孙明%王传彬%王宏伟%陈西钊%冉多良%田克恭
多海剛%趙鐵柱%孫明%王傳彬%王宏偉%陳西釗%冉多良%田剋恭
다해강%조철주%손명%왕전빈%왕굉위%진서쇠%염다량%전극공
H7N2亚型禽流感病毒%HA1基因%表达
H7N2亞型禽流感病毒%HA1基因%錶達
H7N2아형금류감병독%HA1기인%표체
目的表达H7N2亚型禽流感病毒(AIV)HA1基因,用于感染H7亚型禽流感病毒抗体的检测和HA1蛋白功能研究.方法采用RT-PCR方法对H7N2亚型AIV HA1基因进行扩增,将PCR产物克隆于pGEM-T-Easy载体,将该基因插入pGEX-4T-2中构建HA1基因原核表达载体, 转化BL21大肠杆菌后,在IPTG诱导下表达HA1蛋白,Western blot鉴定表达HA1蛋白.电洗脱方法纯化表达HA1蛋白,建立间接ELISA方法,对感染AIV H7、H9、H5亚型AIV阳性血清进行检测.结果成功克隆H7N2亚型AIV的HA1基因,其核苷酸序列长度966bp,编码322个氨基酸残基.构建HA1基因原核表达载体在大肠杆菌内表达出约61×103的HA1融合蛋白.Western blot和ELISA方法鉴定表明:表达HA1蛋白与感染H7亚型 AIV鸡血清有反应,与H5、H9亚型AIV阳性血清没有反应.结论本研究在大肠杆菌中成功表达了H7N2亚型AIV HA1基因蛋白,具有与感染H7亚型AIV阳性血清反应原性,不与H5和H9亚型AIV 感染阳性血清发生反应.
目的錶達H7N2亞型禽流感病毒(AIV)HA1基因,用于感染H7亞型禽流感病毒抗體的檢測和HA1蛋白功能研究.方法採用RT-PCR方法對H7N2亞型AIV HA1基因進行擴增,將PCR產物剋隆于pGEM-T-Easy載體,將該基因插入pGEX-4T-2中構建HA1基因原覈錶達載體, 轉化BL21大腸桿菌後,在IPTG誘導下錶達HA1蛋白,Western blot鑒定錶達HA1蛋白.電洗脫方法純化錶達HA1蛋白,建立間接ELISA方法,對感染AIV H7、H9、H5亞型AIV暘性血清進行檢測.結果成功剋隆H7N2亞型AIV的HA1基因,其覈苷痠序列長度966bp,編碼322箇氨基痠殘基.構建HA1基因原覈錶達載體在大腸桿菌內錶達齣約61×103的HA1融閤蛋白.Western blot和ELISA方法鑒定錶明:錶達HA1蛋白與感染H7亞型 AIV鷄血清有反應,與H5、H9亞型AIV暘性血清沒有反應.結論本研究在大腸桿菌中成功錶達瞭H7N2亞型AIV HA1基因蛋白,具有與感染H7亞型AIV暘性血清反應原性,不與H5和H9亞型AIV 感染暘性血清髮生反應.
목적표체H7N2아형금류감병독(AIV)HA1기인,용우감염H7아형금류감병독항체적검측화HA1단백공능연구.방법채용RT-PCR방법대H7N2아형AIV HA1기인진행확증,장PCR산물극륭우pGEM-T-Easy재체,장해기인삽입pGEX-4T-2중구건HA1기인원핵표체재체, 전화BL21대장간균후,재IPTG유도하표체HA1단백,Western blot감정표체HA1단백.전세탈방법순화표체HA1단백,건립간접ELISA방법,대감염AIV H7、H9、H5아형AIV양성혈청진행검측.결과성공극륭H7N2아형AIV적HA1기인,기핵감산서렬장도966bp,편마322개안기산잔기.구건HA1기인원핵표체재체재대장간균내표체출약61×103적HA1융합단백.Western blot화ELISA방법감정표명:표체HA1단백여감염H7아형 AIV계혈청유반응,여H5、H9아형AIV양성혈청몰유반응.결론본연구재대장간균중성공표체료H7N2아형AIV HA1기인단백,구유여감염H7아형AIV양성혈청반응원성,불여H5화H9아형AIV 감염양성혈청발생반응.
