浙江大学学报（农业与生命科学版）
浙江大學學報（農業與生命科學版）
절강대학학보（농업여생명과학판）
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY(AGRICULTURE & LIFE SCIENCES)
2009年
1期
27-32
,共6页
谢芳%韩文瑜%雷连成%韩俊友%胡博
謝芳%韓文瑜%雷連成%韓俊友%鬍博
사방%한문유%뢰련성%한준우%호박
牛蛙%抗菌肽%ranalexin%原核表达
牛蛙%抗菌肽%ranalexin%原覈錶達
우와%항균태%ranalexin%원핵표체
为了验证重组抗菌肽Ranalexin的抑菌活性,提取牛蛙皮肤组织总RNA,经RT-PCR 扩增抗菌肽基因ranalexin,克隆测序后,将该基因插入pGEX-3X融合表达载体,进行原核表达,通过改变IPTG剂量、培养液pH值、诱导表达温度和诱导时间优化表达条件,并采用谷胱甘肽氧化/还原系统对重组蛋白进行复性,用琼脂扩散法测定其体外抑菌活性.结果显示,扩增获得的牛蛙皮肤抗菌肽基因ranalexin 大小为201 bp,其序列与GenBank公布序列同源性达99.57%;正确构建了pGEX-3X-Ranalexin表达载体,最佳表达条件为IPTG终浓度1.0 mmol·L-1、诱导时间5～6 h;表达产物的分子质量约为34 kDa,并以包涵体的形式表达,经复性纯化后该重组蛋白对金黄色葡萄球菌具有明显的体外抑菌活性.说明牛蛙皮肤抗菌肽基因ranalexin 的原核表达载体构建成功,并获得了具有抑菌活性的重组抗菌肽GST-Ranalexin.
為瞭驗證重組抗菌肽Ranalexin的抑菌活性,提取牛蛙皮膚組織總RNA,經RT-PCR 擴增抗菌肽基因ranalexin,剋隆測序後,將該基因插入pGEX-3X融閤錶達載體,進行原覈錶達,通過改變IPTG劑量、培養液pH值、誘導錶達溫度和誘導時間優化錶達條件,併採用穀胱甘肽氧化/還原繫統對重組蛋白進行複性,用瓊脂擴散法測定其體外抑菌活性.結果顯示,擴增穫得的牛蛙皮膚抗菌肽基因ranalexin 大小為201 bp,其序列與GenBank公佈序列同源性達99.57%;正確構建瞭pGEX-3X-Ranalexin錶達載體,最佳錶達條件為IPTG終濃度1.0 mmol·L-1、誘導時間5～6 h;錶達產物的分子質量約為34 kDa,併以包涵體的形式錶達,經複性純化後該重組蛋白對金黃色葡萄毬菌具有明顯的體外抑菌活性.說明牛蛙皮膚抗菌肽基因ranalexin 的原覈錶達載體構建成功,併穫得瞭具有抑菌活性的重組抗菌肽GST-Ranalexin.
위료험증중조항균태Ranalexin적억균활성,제취우와피부조직총RNA,경RT-PCR 확증항균태기인ranalexin,극륭측서후,장해기인삽입pGEX-3X융합표체재체,진행원핵표체,통과개변IPTG제량、배양액pH치、유도표체온도화유도시간우화표체조건,병채용곡광감태양화/환원계통대중조단백진행복성,용경지확산법측정기체외억균활성.결과현시,확증획득적우와피부항균태기인ranalexin 대소위201 bp,기서렬여GenBank공포서렬동원성체99.57%;정학구건료pGEX-3X-Ranalexin표체재체,최가표체조건위IPTG종농도1.0 mmol·L-1、유도시간5～6 h;표체산물적분자질량약위34 kDa,병이포함체적형식표체,경복성순화후해중조단백대금황색포도구균구유명현적체외억균활성.설명우와피부항균태기인ranalexin 적원핵표체재체구건성공,병획득료구유억균활성적중조항균태GST-Ranalexin.
