畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2009年
9期
1363-1369
,共7页
吴运谱%乔传玲%杨焕良%陈艳%展小过%辛晓光%陈化兰
吳運譜%喬傳玲%楊煥良%陳豔%展小過%辛曉光%陳化蘭
오운보%교전령%양환량%진염%전소과%신효광%진화란
猪流感病毒%H5N1亚型%HA基因%重组腺病毒
豬流感病毒%H5N1亞型%HA基因%重組腺病毒
저류감병독%H5N1아형%HA기인%중조선병독
RT-PCR扩增猪流感病毒A/Swine/Fujian/1/2001(H5N1)株的HA基因,构建重组腺病毒穿梭质粒pDC315-H5HA-EGFP.采用Ad-Max同源重组系统和共转染技术,构建了表达H5N1亚型猪流感病毒HA基因的复制缺陷型重组腺病毒(rAd-H5HA-EGFP).经目的基因PCR检测及序列测定,结果表明:HA基因已经正确地插入到腺病毒的基因组中;通过RT-PCR检测与Western blot分析,结果表明:HA基因能够进行正确转录,并且所表达的蛋白具有相应的生物学活性.子代重组腺病毒rAd-H5HA-EGFP经增殖、纯化后感染性滴度可达2.26×1010 TCID50 mL-1.rAd-H5HA-EGFP免疫BALB/c小鼠能够诱导特异性的HI抗体产生,有效阻止病毒在体内的复制.
RT-PCR擴增豬流感病毒A/Swine/Fujian/1/2001(H5N1)株的HA基因,構建重組腺病毒穿梭質粒pDC315-H5HA-EGFP.採用Ad-Max同源重組繫統和共轉染技術,構建瞭錶達H5N1亞型豬流感病毒HA基因的複製缺陷型重組腺病毒(rAd-H5HA-EGFP).經目的基因PCR檢測及序列測定,結果錶明:HA基因已經正確地插入到腺病毒的基因組中;通過RT-PCR檢測與Western blot分析,結果錶明:HA基因能夠進行正確轉錄,併且所錶達的蛋白具有相應的生物學活性.子代重組腺病毒rAd-H5HA-EGFP經增殖、純化後感染性滴度可達2.26×1010 TCID50 mL-1.rAd-H5HA-EGFP免疫BALB/c小鼠能夠誘導特異性的HI抗體產生,有效阻止病毒在體內的複製.
RT-PCR확증저류감병독A/Swine/Fujian/1/2001(H5N1)주적HA기인,구건중조선병독천사질립pDC315-H5HA-EGFP.채용Ad-Max동원중조계통화공전염기술,구건료표체H5N1아형저류감병독HA기인적복제결함형중조선병독(rAd-H5HA-EGFP).경목적기인PCR검측급서렬측정,결과표명:HA기인이경정학지삽입도선병독적기인조중;통과RT-PCR검측여Western blot분석,결과표명:HA기인능구진행정학전록,병차소표체적단백구유상응적생물학활성.자대중조선병독rAd-H5HA-EGFP경증식、순화후감염성적도가체2.26×1010 TCID50 mL-1.rAd-H5HA-EGFP면역BALB/c소서능구유도특이성적HI항체산생,유효조지병독재체내적복제.
