郑州大学学报（医学版）
鄭州大學學報（醫學版）
정주대학학보（의학판）
JOURNAL OF ZHENGZHOU UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2012年
4期
434-438
,共5页
崔柳青%张璐%张磊%薛乐勋
崔柳青%張璐%張磊%薛樂勛
최류청%장로%장뢰%설악훈
杜氏盐藻%葡萄糖-6-磷酸异构酶%真核细胞%表达
杜氏鹽藻%葡萄糖-6-燐痠異構酶%真覈細胞%錶達
두씨염조%포도당-6-린산이구매%진핵세포%표체
目的:分别构建杜氏盐藻葡萄糖-6-磷酸异构酶(DsGPI)绿色荧光蛋白表达载体和真核表达载体.方法:PCR扩增得到上、下游分别添加EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点的DsGPI基因,双酶切后与绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1连接,得到重组载体pEGFP-C1-DsGPI,转染狗肾细胞MDCK,观察绿色荧光蛋白在细胞中的定位;同理将上、下游分别添加BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点的DsGPI基因与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,得到pcDNA3.1-DsGPI,转染食管癌EC9706细胞,分别应用RT-PCR法和Western blot法检测DsGPI mRNA和蛋白的表达.结果:DsGPI在MDCK细胞中定位于细胞核,在EC9706细胞中被有效表达.结论:成功构建了DsGPI的绿色荧光蛋白表达载体和真核表达载体.
目的:分彆構建杜氏鹽藻葡萄糖-6-燐痠異構酶(DsGPI)綠色熒光蛋白錶達載體和真覈錶達載體.方法:PCR擴增得到上、下遊分彆添加EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位點的DsGPI基因,雙酶切後與綠色熒光蛋白錶達載體pEGFP-C1連接,得到重組載體pEGFP-C1-DsGPI,轉染狗腎細胞MDCK,觀察綠色熒光蛋白在細胞中的定位;同理將上、下遊分彆添加BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位點的DsGPI基因與真覈錶達載體pcDNA3.1(+)連接,得到pcDNA3.1-DsGPI,轉染食管癌EC9706細胞,分彆應用RT-PCR法和Western blot法檢測DsGPI mRNA和蛋白的錶達.結果:DsGPI在MDCK細胞中定位于細胞覈,在EC9706細胞中被有效錶達.結論:成功構建瞭DsGPI的綠色熒光蛋白錶達載體和真覈錶達載體.
목적:분별구건두씨염조포도당-6-린산이구매(DsGPI)록색형광단백표체재체화진핵표체재체.방법:PCR확증득도상、하유분별첨가EcoRⅠ화BamHⅠ매절위점적DsGPI기인,쌍매절후여록색형광단백표체재체pEGFP-C1련접,득도중조재체pEGFP-C1-DsGPI,전염구신세포MDCK,관찰록색형광단백재세포중적정위;동리장상、하유분별첨가BamHⅠ화EcoRⅠ매절위점적DsGPI기인여진핵표체재체pcDNA3.1(+)련접,득도pcDNA3.1-DsGPI,전염식관암EC9706세포,분별응용RT-PCR법화Western blot법검측DsGPI mRNA화단백적표체.결과:DsGPI재MDCK세포중정위우세포핵,재EC9706세포중피유효표체.결론:성공구건료DsGPI적록색형광단백표체재체화진핵표체재체.
