H5N1亚型禽流感病毒NS1基因截短体的克隆与原核表达
H5N1아형금류감병독NS1기인절단체적극륭여원핵표체
Cloning and Procaryotic Expression of the NS1 Gene Truncated Body of Avian Influenza Virus H5N1 Subtype
  • 万方数据
    微生物学杂志 미생물학잡지
    JOURNAL OF MICROBIOLOGY
    2012年 3期 1-6 ,共6页

    郑方亮%朱春玉%商玲玲%马杰良%孙婷婷%艾海新%朱俊峰%段艳婷%朱应%刘宏生

    정방량%주춘옥%상령령%마걸량%손정정%애해신%주준봉%단염정%주응%류굉생

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    禽流感病毒H5N1 NS1蛋白是一种非结构蛋白,在病毒感染过程中发挥着重要的作用.构建基因截短的重组蛋白,可为进一步研究NS1不同结构域与宿主蛋白间的相互作用奠定基础.在成功克隆禽流感病毒H5N1全长NS1基因并测序的基础上,将部分截短基因序列克隆到表达栽体pET28a(+)上,构建基因截短的重组表达质粒pET28a-NS1-RBD和pET28a-NS1-ED,转化大肠埃希菌BL21(DE3),阳性重组质粒经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE检测,获得预期蛋白的表达,然后利用Ni-NTA树脂蛋白纯化系统对重组蛋白进行纯化,并通过Western Blotting进一步确认NS1及截短体蛋白的表达.结果表明,实验成功构建禽流感病毒H5N1亚型的NS1蛋白截短体,并在大肠埃希菌中高效表达,这为进一步研究NS1蛋白不同结构域与宿主蛋白的相互作用提供了实验材料,为深入研究NS1蛋白的生物学功能奠定了坚实基础.
    금류감병독H5N1 NS1단백시일충비결구단백,재병독감염과정중발휘착중요적작용.구건기인절단적중조단백,가위진일보연구NS1불동결구역여숙주단백간적상호작용전정기출.재성공극륭금류감병독H5N1전장NS1기인병측서적기출상,장부분절단기인서렬극륭도표체재체pET28a(+)상,구건기인절단적중조표체질립pET28a-NS1-RBD화pET28a-NS1-ED,전화대장애희균BL21(DE3),양성중조질립경IPTG유도표체후진행SDS-PAGE검측,획득예기단백적표체,연후이용Ni-NTA수지단백순화계통대중조단백진행순화,병통과Western Blotting진일보학인NS1급절단체단백적표체.결과표명,실험성공구건금류감병독H5N1아형적NS1단백절단체,병재대장애희균중고효표체,저위진일보연구NS1단백불동결구역여숙주단백적상호작용제공료실험재료,위심입연구NS1단백적생물학공능전정료견실기출.
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