中华肝脏病杂志
中華肝髒病雜誌
중화간장병잡지
CHINESE JOURNAL OF HEPATOLOGY
2008年
1期
25-28
,共4页
范红梅%杨林%谢奇峰%韩晓燕%吴盟%张富程%姚春斓%李刚%高志良
範紅梅%楊林%謝奇峰%韓曉燕%吳盟%張富程%姚春斕%李剛%高誌良
범홍매%양림%사기봉%한효연%오맹%장부정%요춘란%리강%고지량
癌,肝细胞%细胞凋亡%HBx蛋白,肝炎病毒,乙型%阿霉素%绿色荧光蛋白
癌,肝細胞%細胞凋亡%HBx蛋白,肝炎病毒,乙型%阿黴素%綠色熒光蛋白
암,간세포%세포조망%HBx단백,간염병독,을형%아매소%록색형광단백
目的 探讨乙型肝炎病毒HBx蛋白对阿霉素诱导的肝癌细胞凋亡的影响.方法 将adr亚型HBx基因片段定向插入绿色荧光蛋白(GFP)真核表达载体pEGFP-C1,构建重组体pGFP-HBx.将pEGFP-C1、pGFP-HBx转染HepG2细胞,采用G418筛选抗性克隆、荧光显微镜观察及RT-PCR检测HBx基因表达情况以建立稳定表达细胞株HepG2/GFP、HepG2/GFP-HBx.用阿霉素(2.5μg/ml)分别处理HepG2、HepG2/GFP、HepG2/GFP-HBx细胞,处理后不同时间在显微镜下观察细胞形态变化,并用锥虫蓝染色计数死亡细胞;流式细胞仪检测阿霉素处理36 h后细胞凋亡率.结果 HepG2/GFP、HepG2/GFP-HBx细胞传70代后,仍表达强的GFP;RT-PCR检测显示在HepG2/GFP-HBx细胞有HBx基因转录表达.锥虫蓝染色检测表明阿霉素处理的HepG2、HepG2/GFP细胞发生了明显的时间依赖性细胞死亡,而在HepG2/GFP-HBx和对照组细胞未见明显细胞死亡;流式细胞仪检测显示阿霉素处理36 h后,HepG2/GFP-HBx细胞凋亡率为3.94%,明显低于HepG2(59.03%)、HepG2/GFP细胞(61.38%)(P《0.01),而与未处理对照组细胞凋亡率(2.12%,2.78%,2.55%)差异无统计学意义(P》0.05).结论 成功建立了稳定表达GFP,GFP-HBx的HepG2细胞株;HBx能够抑制阿霉素诱导的HepG2细胞凋亡.
目的 探討乙型肝炎病毒HBx蛋白對阿黴素誘導的肝癌細胞凋亡的影響.方法 將adr亞型HBx基因片段定嚮插入綠色熒光蛋白(GFP)真覈錶達載體pEGFP-C1,構建重組體pGFP-HBx.將pEGFP-C1、pGFP-HBx轉染HepG2細胞,採用G418篩選抗性剋隆、熒光顯微鏡觀察及RT-PCR檢測HBx基因錶達情況以建立穩定錶達細胞株HepG2/GFP、HepG2/GFP-HBx.用阿黴素(2.5μg/ml)分彆處理HepG2、HepG2/GFP、HepG2/GFP-HBx細胞,處理後不同時間在顯微鏡下觀察細胞形態變化,併用錐蟲藍染色計數死亡細胞;流式細胞儀檢測阿黴素處理36 h後細胞凋亡率.結果 HepG2/GFP、HepG2/GFP-HBx細胞傳70代後,仍錶達彊的GFP;RT-PCR檢測顯示在HepG2/GFP-HBx細胞有HBx基因轉錄錶達.錐蟲藍染色檢測錶明阿黴素處理的HepG2、HepG2/GFP細胞髮生瞭明顯的時間依賴性細胞死亡,而在HepG2/GFP-HBx和對照組細胞未見明顯細胞死亡;流式細胞儀檢測顯示阿黴素處理36 h後,HepG2/GFP-HBx細胞凋亡率為3.94%,明顯低于HepG2(59.03%)、HepG2/GFP細胞(61.38%)(P《0.01),而與未處理對照組細胞凋亡率(2.12%,2.78%,2.55%)差異無統計學意義(P》0.05).結論 成功建立瞭穩定錶達GFP,GFP-HBx的HepG2細胞株;HBx能夠抑製阿黴素誘導的HepG2細胞凋亡.
목적 탐토을형간염병독HBx단백대아매소유도적간암세포조망적영향.방법 장adr아형HBx기인편단정향삽입록색형광단백(GFP)진핵표체재체pEGFP-C1,구건중조체pGFP-HBx.장pEGFP-C1、pGFP-HBx전염HepG2세포,채용G418사선항성극륭、형광현미경관찰급RT-PCR검측HBx기인표체정황이건립은정표체세포주HepG2/GFP、HepG2/GFP-HBx.용아매소(2.5μg/ml)분별처리HepG2、HepG2/GFP、HepG2/GFP-HBx세포,처리후불동시간재현미경하관찰세포형태변화,병용추충람염색계수사망세포;류식세포의검측아매소처리36 h후세포조망솔.결과 HepG2/GFP、HepG2/GFP-HBx세포전70대후,잉표체강적GFP;RT-PCR검측현시재HepG2/GFP-HBx세포유HBx기인전록표체.추충람염색검측표명아매소처리적HepG2、HepG2/GFP세포발생료명현적시간의뢰성세포사망,이재HepG2/GFP-HBx화대조조세포미견명현세포사망;류식세포의검측현시아매소처리36 h후,HepG2/GFP-HBx세포조망솔위3.94%,명현저우HepG2(59.03%)、HepG2/GFP세포(61.38%)(P《0.01),이여미처리대조조세포조망솔(2.12%,2.78%,2.55%)차이무통계학의의(P》0.05).결론 성공건립료은정표체GFP,GFP-HBx적HepG2세포주;HBx능구억제아매소유도적HepG2세포조망.
