昆虫学报
昆蟲學報
곤충학보
ACTA ENTOMOLOGICA SINICA
2005年
1期
13-17
,共5页
高波%刘志刚%邢苗%徐宏%罗时文%赖仞
高波%劉誌剛%邢苗%徐宏%囉時文%賴仞
고파%류지강%형묘%서굉%라시문%뢰인
美洲大蠊%重组变应原Cr PI%蛋白表达%亲和层析%免疫印迹
美洲大蠊%重組變應原Cr PI%蛋白錶達%親和層析%免疫印跡
미주대렴%중조변응원Cr PI%단백표체%친화층석%면역인적
以阳性噬菌体克隆为模板,通过PCR扩增出目的基因片段并克隆入T载体,经测序证实为美洲大蠊Periplaneta americana变应原Cr PI后,将该基因亚克隆入表达载体pGEX-5X-1.美洲大蠊变应原Cr PI在大肠杆菌中得到高效表达,但主要以包涵体形式存在于沉淀中.目的蛋白溶于6 mol/L盐酸胍并经稀释复性后,经Glutathione SepharoseTM 4B亲和层析,纯度达90%以上.以蟑螂过敏病人血清进行免疫印迹检测,结果显示重组变应原具有良好的IgE结合活性.
以暘性噬菌體剋隆為模闆,通過PCR擴增齣目的基因片段併剋隆入T載體,經測序證實為美洲大蠊Periplaneta americana變應原Cr PI後,將該基因亞剋隆入錶達載體pGEX-5X-1.美洲大蠊變應原Cr PI在大腸桿菌中得到高效錶達,但主要以包涵體形式存在于沉澱中.目的蛋白溶于6 mol/L鹽痠胍併經稀釋複性後,經Glutathione SepharoseTM 4B親和層析,純度達90%以上.以蟑螂過敏病人血清進行免疫印跡檢測,結果顯示重組變應原具有良好的IgE結閤活性.
이양성서균체극륭위모판,통과PCR확증출목적기인편단병극륭입T재체,경측서증실위미주대렴Periplaneta americana변응원Cr PI후,장해기인아극륭입표체재체pGEX-5X-1.미주대렴변응원Cr PI재대장간균중득도고효표체,단주요이포함체형식존재우침정중.목적단백용우6 mol/L염산고병경희석복성후,경Glutathione SepharoseTM 4B친화층석,순도체90%이상.이장랑과민병인혈청진행면역인적검측,결과현시중조변응원구유량호적IgE결합활성.
