现代检验医学杂志
現代檢驗醫學雜誌
현대검험의학잡지
JOURNAL OF MODERN LABORATORY MEDICINE
2007年
3期
26-28
,共3页
姜南艳%张伟%任君萍%顾炳权%沈建军%张惠中
薑南豔%張偉%任君萍%顧炳權%瀋建軍%張惠中
강남염%장위%임군평%고병권%침건군%장혜중
HMGB1%逆转录%聚合酶链反应%基因表达
HMGB1%逆轉錄%聚閤酶鏈反應%基因錶達
HMGB1%역전록%취합매련반응%기인표체
目的 克隆、表达高迁移率族蛋白1(HMGB1).方法 从人外周血淋巴细胞中提取总RNA,经RT-PCR获得HMGB1基因;将该基因克隆到PMD18-T载体中,测序鉴定;将HMGB1基因插入pET32-A表达载体中,30℃诱导表达4h,进行SDS-PAGE分析;目的蛋白在变性条件下经Ni2+-NTA亲和层析纯化后用Western-Blot证实.结果 DNA测序证明,获得了HMGB1基因,其序列与Gen Bank中报道序列完全一致;SDS-PAGE分析表明,HMGB1蛋白在原核中获得高效表达,表达量约占菌体总蛋白的32%;诱导表达产物主要以包涵体形式存在,6 His-NTA纯化后获得目的 蛋白,Western-Blot结果 显示纯化蛋白具有良好的抗原性.结论 成功表达和纯化了HMGB1基因.
目的 剋隆、錶達高遷移率族蛋白1(HMGB1).方法 從人外週血淋巴細胞中提取總RNA,經RT-PCR穫得HMGB1基因;將該基因剋隆到PMD18-T載體中,測序鑒定;將HMGB1基因插入pET32-A錶達載體中,30℃誘導錶達4h,進行SDS-PAGE分析;目的蛋白在變性條件下經Ni2+-NTA親和層析純化後用Western-Blot證實.結果 DNA測序證明,穫得瞭HMGB1基因,其序列與Gen Bank中報道序列完全一緻;SDS-PAGE分析錶明,HMGB1蛋白在原覈中穫得高效錶達,錶達量約佔菌體總蛋白的32%;誘導錶達產物主要以包涵體形式存在,6 His-NTA純化後穫得目的 蛋白,Western-Blot結果 顯示純化蛋白具有良好的抗原性.結論 成功錶達和純化瞭HMGB1基因.
목적 극륭、표체고천이솔족단백1(HMGB1).방법 종인외주혈림파세포중제취총RNA,경RT-PCR획득HMGB1기인;장해기인극륭도PMD18-T재체중,측서감정;장HMGB1기인삽입pET32-A표체재체중,30℃유도표체4h,진행SDS-PAGE분석;목적단백재변성조건하경Ni2+-NTA친화층석순화후용Western-Blot증실.결과 DNA측서증명,획득료HMGB1기인,기서렬여Gen Bank중보도서렬완전일치;SDS-PAGE분석표명,HMGB1단백재원핵중획득고효표체,표체량약점균체총단백적32%;유도표체산물주요이포함체형식존재,6 His-NTA순화후획득목적 단백,Western-Blot결과 현시순화단백구유량호적항원성.결론 성공표체화순화료HMGB1기인.
