CAJ | 학술논문

[目的]合成猴免疫缺陷病毒(SIV)荧光定量检测标准品,并总结出核糖核酸(RNA)标准品体外合成的基本原则.[方法]首先寻找到SIV保守序列,进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,克隆于T载体,测序,然后在所测得的SIV序列中进一步寻找保守序列,设计带有T7启动子的引物,PCR扩增,将所获得的PCR产物凝胶回收纯化,用,T7RNA聚合酶进行体外合成RNA,再用PCR和电泳检测验证.[结果]通过数次引物调整,最终成功合成了SIV荧光定量PCR标准品.[结论]SIV荧光定量标准品的成功合成必须遵守以下4条基本原则:①必须选择保守序列;②在选择保守序列之后还需要搜索是否含有较多潜在的终止密码或者起始密码,设计引物使这些中止或起始密码排除在PCR目标产物之外;③必须注意将启动予(如T7启动子)挂在适当的引物上,以保证所合成的RNA模板与所要定量检测的RNA模板一致,而不是互补;④合成好RNA后必须检测,以保证不含其他RNA或者未消化完毕的DNA.
[목적]합성후면역결함병독(SIV)형광정량검측표준품,병총결출핵당핵산(RNA)표준품체외합성적기본원칙.[방법]수선심조도SIV보수서렬,진행역전록취합매련반응(RT-PCR)확증,극륭우T재체,측서,연후재소측득적SIV서렬중진일보심조보수서렬,설계대유T7계동자적인물,PCR확증,장소획득적PCR산물응효회수순화,용,T7RNA취합매진행체외합성RNA,재용PCR화전영검측험증.[결과]통과수차인물조정,최종성공합성료SIV형광정량PCR표준품.[결론]SIV형광정량표준품적성공합성필수준수이하4조기본원칙:①필수선택보수서렬;②재선택보수서렬지후환수요수색시부함유교다잠재적종지밀마혹자기시밀마,설계인물사저사중지혹기시밀마배제재PCR목표산물지외;③필수주의장계동여(여T7계동자)괘재괄당적인물상,이보증소합성적RNA모판여소요정량검측적RNA모판일치,이불시호보;④합성호RNA후필수검측,이보증불함기타RNA혹자미소화완필적DNA.