CAJ | 학술논문

目的:制备基于Xcm Ⅰ酶切的高效TA克隆载体,并检测其克隆PCR产物的效果.方法:设计一对互补配对的寡核苷酸,经过变性及退火后插入质粒pUC19的多克隆位点,从而在该多克隆位点中引入2个Xcm Ⅰ酶切位点,用Xcm Ⅰ酶切后即获得含有3'突出T碱基的T载体;为了提高该T载体的克隆效率,优化了2个Xcm Ⅰ酶切位点之间的碱基数目,排除了载体自连产生白色克隆的可能性,使假阳性大大减少;此外,为了便于完全酶切与未完全酶切载体的分离,在2个Xcm Ⅰ之间插入了一段无关DNA片段.结果:改进得到的T载体可以有效克隆PCR产物,其阳性克隆率可达95%.结论:构建了基于XcmⅠ酶切的TA克隆载体,经过改进的T载体具有很高的克隆效率.
목적:제비기우Xcm Ⅰ매절적고효TA극륭재체,병검측기극륭PCR산물적효과.방법:설계일대호보배대적과핵감산,경과변성급퇴화후삽입질립pUC19적다극륭위점,종이재해다극륭위점중인입2개Xcm Ⅰ매절위점,용Xcm Ⅰ매절후즉획득함유3'돌출T감기적T재체;위료제고해T재체적극륭효솔,우화료2개Xcm Ⅰ매절위점지간적감기수목,배제료재체자련산생백색극륭적가능성,사가양성대대감소;차외,위료편우완전매절여미완전매절재체적분리,재2개Xcm Ⅰ지간삽입료일단무관DNA편단.결과:개진득도적T재체가이유효극륭PCR산물,기양성극륭솔가체95%.결론:구건료기우XcmⅠ매절적TA극륭재체,경과개진적T재체구유흔고적극륭효솔.