CAJ | 학술논문

目的在我国狂犬病均由基因1型狂犬病病毒(rabies virus,RV)引起.本研究针对RV N基因保守序列设计并合成了一套简并引物和Taqman探针,在优化反应条件的基础上,建立了检测RV核酸的一步法荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测方法.方法与结果该方法能特异检测基因1型,不能检测基因2-7型和犬瘟热病毒(CDV)、犬细小病毒(CPV)、犬腺病病毒(CAV)、水泡性口炎病毒(VSV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)等5种非狂犬病病原体,其检测灵敏度可达到4.68个TCID50的病毒含量.用该方法对29份新鲜和5份腐败的临床犬脑组织样品进行检测,并与国际金标准确诊方法狂犬病荧光抗体染色法(FAT)和乳鼠脑内接种试验(MIT)及本实验室建立的套式RT-PCR方法进行比较.结果表明所建立的qRT-PCR与套式RT-PCR的符合率为100%,二者均检测出12份阳性的新鲜样品和5份阳性的腐败样品,而FAT只检测出12份阳性的新鲜样品和1份阳性的腐败样品,MIT只检测出12份阳性,未检测出阳性腐败样品.检测中FAT和MIT确诊的所有阳性样品在qRT-PCR检测均是阳性,而在FAT检测为阴性的4份腐败样品在qRT-PCR为阳性,说明所建立的qRT-PCR方法准确性达到了FAT和MIT的水平,而且灵敏度更高,更适合于腐败样品的检测.结论研究结果表明该qRT-PCR方法特异性好、灵敏度高、污染率低、操作简单,在我国动物狂犬病临床诊断上具有巨大的应用价值.
목적 재아국광견병균유기인1형광견병병독(rabies virus,RV)인기.본연구침대RV N기인보수서렬설계병합성료일투간병인물화Taqman탐침,재우화반응조건적기출상,건립료검측RV핵산적일보법형광정량RT-PCR(qRT-PCR)검측방법.방법 여결과해방법능특이검측기인1형,불능검측기인2-7형화견온열병독(CDV)、견세소병독(CPV)、견선병병독(CAV)、수포성구염병독(VSV)、일본을형뇌염병독(JEV)등5충비광견병병원체,기검측령민도가체도4.68개TCID50적병독함량.용해방법대29빈신선화5빈부패적림상견뇌조직양품진행검측,병여국제금표준학진방법광견병형광항체염색법(FAT)화유서뇌내접충시험(MIT)급본실험실건립적투식RT-PCR방법진행비교.결과 표명소건립적qRT-PCR여투식RT-PCR적부합솔위100%,이자균검측출12빈양성적신선양품화5빈양성적부패양품,이FAT지검측출12빈양성적신선양품화1빈양성적부패양품,MIT지검측출12빈양성,미검측출양성부패양품.검측중FAT화MIT학진적소유양성양품재qRT-PCR검측균시양성,이재FAT검측위음성적4빈부패양품재qRT-PCR위양성,설명소건립적qRT-PCR방법준학성체도료FAT화MIT적수평,이차령민도경고,경괄합우부패양품적검측.결론 연구결과표명해qRT-PCR방법특이성호、령민도고、오염솔저、조작간단,재아국동물광견병림상진단상구유거대적응용개치.