生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2008年
5期
887-891
,共5页
袁伟%孙伟%杨爽%闫继东%翟春利%杜君%王兆琦%安迪%朱天慧
袁偉%孫偉%楊爽%閆繼東%翟春利%杜君%王兆琦%安迪%硃天慧
원위%손위%양상%염계동%적춘리%두군%왕조기%안적%주천혜
蛋白质沉淀技术%谷胱甘肽巯基转移酶%麦芽糖结合蛋白%LMO2
蛋白質沉澱技術%穀胱甘肽巰基轉移酶%麥芽糖結閤蛋白%LMO2
단백질침정기술%곡광감태구기전이매%맥아당결합단백%LMO2
融合蛋白沉淀技术是一种用来研究蛋白质相互作用的新的体外实验技术, 通常利用蛋白亲和标签与探针蛋白融合表达来钓取未知相互作用蛋白或验证已知蛋白间的相互作用, 其中以谷胱甘肽巯基转移酶(GST)标签最为常用.LMO2(由LIM only缩写得名, 也称Ttg-2或Rbtn2)是一种小分子量难溶蛋白.利用原核系统分别表达了含有GST和麦芽糖结合蛋白(MBP)两种标签的LMO2融合蛋白, 发现GST-LMO2融合蛋白以包涵体的形式表达, 而MBP-LMO2融合蛋白则能够以可溶形式表达, 而且MBP-LMO2的表达量明显高于GST-LMO2融合蛋白.将可溶性的MBP-LMO2融合蛋白和复性后的GST-LMO2融合蛋白分别用于钓取K562细胞中LMO2的结合蛋白, 结果显示二者都可以结合K562细胞中内源性的GATA1蛋白, 而MBP-LMO2融合蛋白捕获的GATA1蛋白明显多于复性后的GST-LMO2融合蛋白.这一结果提示, 在研究一些分子量小、疏水性强的蛋白质时改变标签蛋白可能是一种有益的尝试.
融閤蛋白沉澱技術是一種用來研究蛋白質相互作用的新的體外實驗技術, 通常利用蛋白親和標籤與探針蛋白融閤錶達來釣取未知相互作用蛋白或驗證已知蛋白間的相互作用, 其中以穀胱甘肽巰基轉移酶(GST)標籤最為常用.LMO2(由LIM only縮寫得名, 也稱Ttg-2或Rbtn2)是一種小分子量難溶蛋白.利用原覈繫統分彆錶達瞭含有GST和麥芽糖結閤蛋白(MBP)兩種標籤的LMO2融閤蛋白, 髮現GST-LMO2融閤蛋白以包涵體的形式錶達, 而MBP-LMO2融閤蛋白則能夠以可溶形式錶達, 而且MBP-LMO2的錶達量明顯高于GST-LMO2融閤蛋白.將可溶性的MBP-LMO2融閤蛋白和複性後的GST-LMO2融閤蛋白分彆用于釣取K562細胞中LMO2的結閤蛋白, 結果顯示二者都可以結閤K562細胞中內源性的GATA1蛋白, 而MBP-LMO2融閤蛋白捕穫的GATA1蛋白明顯多于複性後的GST-LMO2融閤蛋白.這一結果提示, 在研究一些分子量小、疏水性彊的蛋白質時改變標籤蛋白可能是一種有益的嘗試.
융합단백침정기술시일충용래연구단백질상호작용적신적체외실험기술, 통상이용단백친화표첨여탐침단백융합표체래조취미지상호작용단백혹험증이지단백간적상호작용, 기중이곡광감태구기전이매(GST)표첨최위상용.LMO2(유LIM only축사득명, 야칭Ttg-2혹Rbtn2)시일충소분자량난용단백.이용원핵계통분별표체료함유GST화맥아당결합단백(MBP)량충표첨적LMO2융합단백, 발현GST-LMO2융합단백이포함체적형식표체, 이MBP-LMO2융합단백칙능구이가용형식표체, 이차MBP-LMO2적표체량명현고우GST-LMO2융합단백.장가용성적MBP-LMO2융합단백화복성후적GST-LMO2융합단백분별용우조취K562세포중LMO2적결합단백, 결과현시이자도가이결합K562세포중내원성적GATA1단백, 이MBP-LMO2융합단백포획적GATA1단백명현다우복성후적GST-LMO2융합단백.저일결과제시, 재연구일사분자량소、소수성강적단백질시개변표첨단백가능시일충유익적상시.
