河南农业大学学报
河南農業大學學報
하남농업대학학보
ACTA AGRICULTURAE UNIVERSITATIS HENANENSIS
2006年
2期
130-132,141
,共4页
王燕萍%曹俊剑%刘海礁%崔红
王燕萍%曹俊劍%劉海礁%崔紅
왕연평%조준검%류해초%최홍
烟草%商陆抗病毒蛋白(PAP)%cDNA克隆%基因转导%烟草花叶病
煙草%商陸抗病毒蛋白(PAP)%cDNA剋隆%基因轉導%煙草花葉病
연초%상륙항병독단백(PAP)%cDNA극륭%기인전도%연초화협병
以美洲商陆(Phytolacca americana L.)为材料,利用RT-PCR方法克隆商陆抗病毒蛋白(PAP)的cDNA,并构建双元植物表达载体PBinARpap.用捕获该质粒的根癌农杆菌菌株LBA4404与烟草叶片外植体共培养,并在附加30 mg·L-1Kan的MS+0.1 mg·L-1IAA+1.5 mg·L-1BA的培养基上诱导植株分化,再生芽在附加30 mg·L-1Kan的MS培养基上生根,实现再生植株.Kan阳性植株经PCR-Sourthern检测筛选,得到PCR阳性植株,证明异源PAP基因在烟草基因组中的整合;经过RT-PCR检测,证明PAP基因在RNA转录水平上有表达;攻毒试验表明,转基因烟草植株对供试病毒TMV具有明显抗性.
以美洲商陸(Phytolacca americana L.)為材料,利用RT-PCR方法剋隆商陸抗病毒蛋白(PAP)的cDNA,併構建雙元植物錶達載體PBinARpap.用捕穫該質粒的根癌農桿菌菌株LBA4404與煙草葉片外植體共培養,併在附加30 mg·L-1Kan的MS+0.1 mg·L-1IAA+1.5 mg·L-1BA的培養基上誘導植株分化,再生芽在附加30 mg·L-1Kan的MS培養基上生根,實現再生植株.Kan暘性植株經PCR-Sourthern檢測篩選,得到PCR暘性植株,證明異源PAP基因在煙草基因組中的整閤;經過RT-PCR檢測,證明PAP基因在RNA轉錄水平上有錶達;攻毒試驗錶明,轉基因煙草植株對供試病毒TMV具有明顯抗性.
이미주상륙(Phytolacca americana L.)위재료,이용RT-PCR방법극륭상륙항병독단백(PAP)적cDNA,병구건쌍원식물표체재체PBinARpap.용포획해질립적근암농간균균주LBA4404여연초협편외식체공배양,병재부가30 mg·L-1Kan적MS+0.1 mg·L-1IAA+1.5 mg·L-1BA적배양기상유도식주분화,재생아재부가30 mg·L-1Kan적MS배양기상생근,실현재생식주.Kan양성식주경PCR-Sourthern검측사선,득도PCR양성식주,증명이원PAP기인재연초기인조중적정합;경과RT-PCR검측,증명PAP기인재RNA전록수평상유표체;공독시험표명,전기인연초식주대공시병독TMV구유명현항성.
