南京师大学报（自然科学版）
南京師大學報（自然科學版）
남경사대학보（자연과학판）
JOURNAL OF NANJING NORMAL UNIVERSITY (NATURAL SCIENCE EDITION)
2006年
3期
62-65
,共4页
王旻东%孙自勇%陈俊勇%吴盛%智强%刘建宁
王旻東%孫自勇%陳俊勇%吳盛%智彊%劉建寧
왕민동%손자용%진준용%오성%지강%류건저
人白细胞介素-10(hIL-10)%克隆%表达%大肠杆菌%生物学活性%夹心ELISA
人白細胞介素-10(hIL-10)%剋隆%錶達%大腸桿菌%生物學活性%夾心ELISA
인백세포개소-10(hIL-10)%극륭%표체%대장간균%생물학활성%협심ELISA
构建了含有人白细胞介素-hIL-10(Human Interleukin 10,hIL-10)基因的重组质粒,在大肠杆菌中的高效表达,并对其生物学活性进行了鉴定.用RT-PCR扩增hIL-10 cDNA,并插入原核表达载体PET-32b.将重组质粒转入BL21(DE3)感受态细胞,在37℃用IPTG诱导hIL-10表达.表达的重组蛋白经复性纯化后,用夹心ELISA法检测其对外周血单核细胞(PBMC)合成IFN-γ的抑制作用.重组质粒PET-32b/hIL-10的DNA序列分析显示,克隆的DNA序列和文献报道的hIL-10 cDNA序列一致.SDS-PAGE表明,重组蛋白相对分子质量为18 000.活性测定结果显示,重组蛋白能显著抑制PBMC合成IFN-γ.这表明构建的PET-32b/hIL-10可以在大肠杆菌中高效表达,经复性和纯化后,获得了具有高纯度和活性的hIL-10.
構建瞭含有人白細胞介素-hIL-10(Human Interleukin 10,hIL-10)基因的重組質粒,在大腸桿菌中的高效錶達,併對其生物學活性進行瞭鑒定.用RT-PCR擴增hIL-10 cDNA,併插入原覈錶達載體PET-32b.將重組質粒轉入BL21(DE3)感受態細胞,在37℃用IPTG誘導hIL-10錶達.錶達的重組蛋白經複性純化後,用夾心ELISA法檢測其對外週血單覈細胞(PBMC)閤成IFN-γ的抑製作用.重組質粒PET-32b/hIL-10的DNA序列分析顯示,剋隆的DNA序列和文獻報道的hIL-10 cDNA序列一緻.SDS-PAGE錶明,重組蛋白相對分子質量為18 000.活性測定結果顯示,重組蛋白能顯著抑製PBMC閤成IFN-γ.這錶明構建的PET-32b/hIL-10可以在大腸桿菌中高效錶達,經複性和純化後,穫得瞭具有高純度和活性的hIL-10.
구건료함유인백세포개소-hIL-10(Human Interleukin 10,hIL-10)기인적중조질립,재대장간균중적고효표체,병대기생물학활성진행료감정.용RT-PCR확증hIL-10 cDNA,병삽입원핵표체재체PET-32b.장중조질립전입BL21(DE3)감수태세포,재37℃용IPTG유도hIL-10표체.표체적중조단백경복성순화후,용협심ELISA법검측기대외주혈단핵세포(PBMC)합성IFN-γ적억제작용.중조질립PET-32b/hIL-10적DNA서렬분석현시,극륭적DNA서렬화문헌보도적hIL-10 cDNA서렬일치.SDS-PAGE표명,중조단백상대분자질량위18 000.활성측정결과현시,중조단백능현저억제PBMC합성IFN-γ.저표명구건적PET-32b/hIL-10가이재대장간균중고효표체,경복성화순화후,획득료구유고순도화활성적hIL-10.
