第四军医大学学报
第四軍醫大學學報
제사군의대학학보
JOURNAL OF THE FOURTH MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2007年
16期
1441-1444
,共4页
hUNC93-B1基因%心血管疾病%基因表达%蛋白纯化
hUNC93-B1基因%心血管疾病%基因錶達%蛋白純化
hUNC93-B1기인%심혈관질병%기인표체%단백순화
目的:构建人hUNC93-B1基因的原核表达载体,诱导其表达并纯化该蛋白,制备特异性高效价抗体. 方法:设计针对hUNC93-B1基因的特异性引物,通过PCR的方法扩增目的基因,克隆入pMD-18T载体,测序全部正确后亚克隆入原核表达载体pRSET-A. 将构建的载体导入大肠杆菌BL21中,用IPTG诱导表达. 经SDS-PAGE电泳鉴定后用镍柱纯化融合蛋白. 与免疫佐剂联用,免疫家兔制备特异性抗体. 结果:PCR扩增得到长度为1808 bp的片断,结果与GenBank中人hUNC93-B1的基因序列完全一致,成功构建了原核表达载体hUNC93-B1-pRSET-A. 导入大肠杆菌后经诱导得到一条约Mr 72 000的新蛋白条带. 免疫家兔后获得了1:64 000的高效价特异性抗人hUNC93-B1血清. 结论:成功地克隆了人hUNC93-B1基因,使其编码的蛋白质在原核细胞中顺利表达,并纯化出该种蛋白. 制备了特异性抗体,为研究hUNC93-B1基因与人类心血管疾病的关系提供依据.
目的:構建人hUNC93-B1基因的原覈錶達載體,誘導其錶達併純化該蛋白,製備特異性高效價抗體. 方法:設計針對hUNC93-B1基因的特異性引物,通過PCR的方法擴增目的基因,剋隆入pMD-18T載體,測序全部正確後亞剋隆入原覈錶達載體pRSET-A. 將構建的載體導入大腸桿菌BL21中,用IPTG誘導錶達. 經SDS-PAGE電泳鑒定後用鎳柱純化融閤蛋白. 與免疫佐劑聯用,免疫傢兔製備特異性抗體. 結果:PCR擴增得到長度為1808 bp的片斷,結果與GenBank中人hUNC93-B1的基因序列完全一緻,成功構建瞭原覈錶達載體hUNC93-B1-pRSET-A. 導入大腸桿菌後經誘導得到一條約Mr 72 000的新蛋白條帶. 免疫傢兔後穫得瞭1:64 000的高效價特異性抗人hUNC93-B1血清. 結論:成功地剋隆瞭人hUNC93-B1基因,使其編碼的蛋白質在原覈細胞中順利錶達,併純化齣該種蛋白. 製備瞭特異性抗體,為研究hUNC93-B1基因與人類心血管疾病的關繫提供依據.
목적:구건인hUNC93-B1기인적원핵표체재체,유도기표체병순화해단백,제비특이성고효개항체. 방법:설계침대hUNC93-B1기인적특이성인물,통과PCR적방법확증목적기인,극륭입pMD-18T재체,측서전부정학후아극륭입원핵표체재체pRSET-A. 장구건적재체도입대장간균BL21중,용IPTG유도표체. 경SDS-PAGE전영감정후용얼주순화융합단백. 여면역좌제련용,면역가토제비특이성항체. 결과:PCR확증득도장도위1808 bp적편단,결과여GenBank중인hUNC93-B1적기인서렬완전일치,성공구건료원핵표체재체hUNC93-B1-pRSET-A. 도입대장간균후경유도득도일조약Mr 72 000적신단백조대. 면역가토후획득료1:64 000적고효개특이성항인hUNC93-B1혈청. 결론:성공지극륭료인hUNC93-B1기인,사기편마적단백질재원핵세포중순리표체,병순화출해충단백. 제비료특이성항체,위연구hUNC93-B1기인여인류심혈관질병적관계제공의거.
