猪血凝性脑脊髓炎病毒PK细胞膜受体的鉴定
저혈응성뇌척수염병독PK세포막수체적감정
Identification of Hemagglutinating encephalomyelitis virus Receptor in PK Cells Membrane
  • 万方数据
    农业生物技术学报 농업생물기술학보
    JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
    2008年 1期 20-23 ,共4页

    陆慧君%贺文琦%宋德光%刘立国%常灵竹%李志萍%陈克研%高丰

    륙혜군%하문기%송덕광%류입국%상령죽%리지평%진극연%고봉

    血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)%病毒铺覆蛋白结合试验(VOPBA)%受体 血凝性腦脊髓炎病毒(HEV)%病毒鋪覆蛋白結閤試驗(VOPBA)%受體
    혈응성뇌척수염병독(HEV)%병독포복단백결합시험(VOPBA)%수체
    在毕赤酵母(Pichia pastoris)中表达猪血凝性脑脊髓炎病毒(Hemagglutinating encephalomyelitis virus,HEV)67N株S蛋白片段,纯化后免疫家兔,获得兔抗HEV-S蛋白特异性抗体;提取PK细胞膜蛋白,SDS-PAGE电泳后,转印NC膜,以纯化的S1蛋白代替病毒,利用改进的病毒铺覆蛋白结合试验(COPBA)对PK细胞膜受体进行鉴定.结果扩增获得1 797 bp的S1目的基因片段,用S1特异性引物和AOX1通用引物PCR鉴定结果表明,实验成功地构建了重组酵母表达质粒,重组酵母菌经1%甲醇诱导,在培养基上清中检测到73 kD目的蛋白.Western blot分析发现,该重组蛋白可与HEV多克隆抗体发生特异性血清反应;提取的PK细胞膜蛋白转膜后与纯化的S1目的蛋白结合,DAB显色发现在90 kD处有清晰的蛋白带.
    재필적효모(Pichia pastoris)중표체저혈응성뇌척수염병독(Hemagglutinating encephalomyelitis virus,HEV)67N주S단백편단,순화후면역가토,획득토항HEV-S단백특이성항체;제취PK세포막단백,SDS-PAGE전영후,전인NC막,이순화적S1단백대체병독,이용개진적병독포복단백결합시험(COPBA)대PK세포막수체진행감정.결과확증획득1 797 bp적S1목적기인편단,용S1특이성인물화AOX1통용인물PCR감정결과표명,실험성공지구건료중조효모표체질립,중조효모균경1%갑순유도,재배양기상청중검측도73 kD목적단백.Western blot분석발현,해중조단백가여HEV다극륭항체발생특이성혈청반응;제취적PK세포막단백전막후여순화적S1목적단백결합,DAB현색발현재90 kD처유청석적단백대.
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