中国兽医学报
中國獸醫學報
중국수의학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE
2008年
4期
403-406
,共4页
袁子国%张秀香%刘全%高胜岩%徐慧娟%张守峰%刘晔%扈荣良
袁子國%張秀香%劉全%高勝巖%徐慧娟%張守峰%劉曄%扈榮良
원자국%장수향%류전%고성암%서혜연%장수봉%류엽%호영량
伪狂犬病病毒%胸苷激酶基因%转移载体%LacZ基因
偽狂犬病病毒%胸苷激酶基因%轉移載體%LacZ基因
위광견병병독%흉감격매기인%전이재체%LacZ기인
伪狂犬病病毒TK-/gI-株基因组经AscⅠ酶切获得含PK基因的8.7 kb片段,将此片段克隆入pPolyⅡ载体的AscⅠ位点,获得中间载体P8-AA,将LacZ表达盒插入其SphⅠ/NdeⅠ位点,构建重组转移载体P8AA-lacZ,将其与伪狂犬病病毒TK-/gI-株基因组共转染PK-15细胞,细胞出现病变后通过覆盖含有X-gal的营养琼脂进行蓝白斑筛选,通过蚀斑克隆方法分离到重组体PRV(rPRV),且经过连续传代的rPRV仍能稳定的表达β-半乳糖苷酶活性.通过对重组病毒PRV-LacZ和亲本株TK-/gI-株TCID50的试验表明,PK基因的缺失对病毒增殖无影响.
偽狂犬病病毒TK-/gI-株基因組經AscⅠ酶切穫得含PK基因的8.7 kb片段,將此片段剋隆入pPolyⅡ載體的AscⅠ位點,穫得中間載體P8-AA,將LacZ錶達盒插入其SphⅠ/NdeⅠ位點,構建重組轉移載體P8AA-lacZ,將其與偽狂犬病病毒TK-/gI-株基因組共轉染PK-15細胞,細胞齣現病變後通過覆蓋含有X-gal的營養瓊脂進行藍白斑篩選,通過蝕斑剋隆方法分離到重組體PRV(rPRV),且經過連續傳代的rPRV仍能穩定的錶達β-半乳糖苷酶活性.通過對重組病毒PRV-LacZ和親本株TK-/gI-株TCID50的試驗錶明,PK基因的缺失對病毒增殖無影響.
위광견병병독TK-/gI-주기인조경AscⅠ매절획득함PK기인적8.7 kb편단,장차편단극륭입pPolyⅡ재체적AscⅠ위점,획득중간재체P8-AA,장LacZ표체합삽입기SphⅠ/NdeⅠ위점,구건중조전이재체P8AA-lacZ,장기여위광견병병독TK-/gI-주기인조공전염PK-15세포,세포출현병변후통과복개함유X-gal적영양경지진행람백반사선,통과식반극륭방법분리도중조체PRV(rPRV),차경과련속전대적rPRV잉능은정적표체β-반유당감매활성.통과대중조병독PRV-LacZ화친본주TK-/gI-주TCID50적시험표명,PK기인적결실대병독증식무영향.
