中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2008年
9期
752-755
,共4页
冯惟萍%韩跃武%任慧子%陈建国%张庆华%卢天龙
馮惟萍%韓躍武%任慧子%陳建國%張慶華%盧天龍
풍유평%한약무%임혜자%진건국%장경화%로천룡
天蚕素A-蛙皮素杂合肽%突变体%融合表达%抗菌活性
天蠶素A-蛙皮素雜閤肽%突變體%融閤錶達%抗菌活性
천잠소A-와피소잡합태%돌변체%융합표체%항균활성
目的 构建天蚕素A(1～8)-蛙皮素(1～12)杂合基因抗菌肽(CA-MA杂合肽)突变体,在大肠杆菌中融合表达,并进行抗菌活性检测.方法 采用PCR体外定点突变技术,设计1对方向相反的引物,其中1个引物引入突变点,应用高保真的Polybest DNA多聚酶进行重组表达质粒pGEX-4T-1-CA-MA的PCR扩增,使CA-MA杂合肽第16位密码子由AGT突变为TGG.将扩增片段自身连接,构建CA-MA杂合肽突变重组表达质粒pGEX-4T-1-W16-CA-MA,转化E. coli BL21,IPTG诱导表达突变体蛋白W16-CA-MA,并对表达产物进行纯化.分离GST融合蛋白后,进行抗菌活性检测.结果 重组突变表达质粒DNA测序结果表明,在预期位点发生了突变;突变蛋白在大肠杆菌中的表达量约占茵体总蛋白的18%;纯化后蛋白纯度可达75%以上,并具有一定的抗菌活性.结论 已成功获得了具有抗菌活性的杂合肽突变体W16-CA-MA.
目的 構建天蠶素A(1～8)-蛙皮素(1～12)雜閤基因抗菌肽(CA-MA雜閤肽)突變體,在大腸桿菌中融閤錶達,併進行抗菌活性檢測.方法 採用PCR體外定點突變技術,設計1對方嚮相反的引物,其中1箇引物引入突變點,應用高保真的Polybest DNA多聚酶進行重組錶達質粒pGEX-4T-1-CA-MA的PCR擴增,使CA-MA雜閤肽第16位密碼子由AGT突變為TGG.將擴增片段自身連接,構建CA-MA雜閤肽突變重組錶達質粒pGEX-4T-1-W16-CA-MA,轉化E. coli BL21,IPTG誘導錶達突變體蛋白W16-CA-MA,併對錶達產物進行純化.分離GST融閤蛋白後,進行抗菌活性檢測.結果 重組突變錶達質粒DNA測序結果錶明,在預期位點髮生瞭突變;突變蛋白在大腸桿菌中的錶達量約佔茵體總蛋白的18%;純化後蛋白純度可達75%以上,併具有一定的抗菌活性.結論 已成功穫得瞭具有抗菌活性的雜閤肽突變體W16-CA-MA.
목적 구건천잠소A(1～8)-와피소(1～12)잡합기인항균태(CA-MA잡합태)돌변체,재대장간균중융합표체,병진행항균활성검측.방법 채용PCR체외정점돌변기술,설계1대방향상반적인물,기중1개인물인입돌변점,응용고보진적Polybest DNA다취매진행중조표체질립pGEX-4T-1-CA-MA적PCR확증,사CA-MA잡합태제16위밀마자유AGT돌변위TGG.장확증편단자신련접,구건CA-MA잡합태돌변중조표체질립pGEX-4T-1-W16-CA-MA,전화E. coli BL21,IPTG유도표체돌변체단백W16-CA-MA,병대표체산물진행순화.분리GST융합단백후,진행항균활성검측.결과 중조돌변표체질립DNA측서결과표명,재예기위점발생료돌변;돌변단백재대장간균중적표체량약점인체총단백적18%;순화후단백순도가체75%이상,병구유일정적항균활성.결론 이성공획득료구유항균활성적잡합태돌변체W16-CA-MA.
