西南民族大学学报（自然科学版）
西南民族大學學報（自然科學版）
서남민족대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF SOUTHWEST NATIONALITIES COLLEGE·NATURAL SCIENCE EDITION
2009年
1期
92-97
,共6页
高博%杨晓农%于学辉%刘内生%向毅勇%曾光志
高博%楊曉農%于學輝%劉內生%嚮毅勇%曾光誌
고박%양효농%우학휘%류내생%향의용%증광지
猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)%荧光定量RT-PCR%TaqMan荧光探针%定量检测
豬瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)%熒光定量RT-PCR%TaqMan熒光探針%定量檢測
저온토화약독역묘주(HCLV)%형광정량RT-PCR%TaqMan형광탐침%정량검측
在猪瘟病毒兔化弱毒疫苗株(HCLV)的5′端非编码区设计一对引物和一条TaqMan探针, 通过优化反应条件, 成功建立了特异性检测HCLV的荧光定量RT-PCR方法. 结果表明:该方法检测的最低拷贝数为45拷贝/μL, 灵敏度比普通PCR方法高104倍, 在较广的范围内(4.5×101～4.5×106 拷贝/μL)有良好的线性关系(r=0.994);分别以乙型脑炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、副猪嗜血杆菌、牛病毒性腹泻/黏膜病病毒作为模板进行TaqMan RT-PCR扩增, 未出现阳性信号;4个不同浓度标准品组内试验变异系数为1.90%～5.82%, 组间试验变异系数为4.02%～5.69%;HCLV 3个cDNA样本组内试验变异系数为3.72%～4.93%;组间试验变异系数为2.99%～4.02%. 该方法具有很好的灵敏性、特异性及稳定性, 能够快速准确定量检测HCLV, 为HCLV疫苗的研制、猪瘟病毒分子生物学等方面研究提供了一种快捷有效的工具.
在豬瘟病毒兔化弱毒疫苗株(HCLV)的5′耑非編碼區設計一對引物和一條TaqMan探針, 通過優化反應條件, 成功建立瞭特異性檢測HCLV的熒光定量RT-PCR方法. 結果錶明:該方法檢測的最低拷貝數為45拷貝/μL, 靈敏度比普通PCR方法高104倍, 在較廣的範圍內(4.5×101～4.5×106 拷貝/μL)有良好的線性關繫(r=0.994);分彆以乙型腦炎病毒、豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒、副豬嗜血桿菌、牛病毒性腹瀉/黏膜病病毒作為模闆進行TaqMan RT-PCR擴增, 未齣現暘性信號;4箇不同濃度標準品組內試驗變異繫數為1.90%～5.82%, 組間試驗變異繫數為4.02%～5.69%;HCLV 3箇cDNA樣本組內試驗變異繫數為3.72%～4.93%;組間試驗變異繫數為2.99%～4.02%. 該方法具有很好的靈敏性、特異性及穩定性, 能夠快速準確定量檢測HCLV, 為HCLV疫苗的研製、豬瘟病毒分子生物學等方麵研究提供瞭一種快捷有效的工具.
재저온병독토화약독역묘주(HCLV)적5′단비편마구설계일대인물화일조TaqMan탐침, 통과우화반응조건, 성공건립료특이성검측HCLV적형광정량RT-PCR방법. 결과표명:해방법검측적최저고패수위45고패/μL, 령민도비보통PCR방법고104배, 재교엄적범위내(4.5×101～4.5×106 고패/μL)유량호적선성관계(r=0.994);분별이을형뇌염병독、저번식여호흡종합정병독、부저기혈간균、우병독성복사/점막병병독작위모판진행TaqMan RT-PCR확증, 미출현양성신호;4개불동농도표준품조내시험변이계수위1.90%～5.82%, 조간시험변이계수위4.02%～5.69%;HCLV 3개cDNA양본조내시험변이계수위3.72%～4.93%;조간시험변이계수위2.99%～4.02%. 해방법구유흔호적령민성、특이성급은정성, 능구쾌속준학정량검측HCLV, 위HCLV역묘적연제、저온병독분자생물학등방면연구제공료일충쾌첩유효적공구.
