中国烟草学报
中國煙草學報
중국연초학보
ACTA TABACARIA SINICA
2011年
5期
87-89,95
,共4页
刘萍%纪玲玲%郝兴安%吴云锋%成巨龙
劉萍%紀玲玲%郝興安%吳雲鋒%成巨龍
류평%기령령%학흥안%오운봉%성거룡
烟草脉带花叶病毒%外壳蛋白%原核表达%抗血清
煙草脈帶花葉病毒%外殼蛋白%原覈錶達%抗血清
연초맥대화협병독%외각단백%원핵표체%항혈청
根据烟草脉带花叶病毒(TVBMV)CP序列合成上下游引物,利用RT-PCR方法获得了(TVBMV)CP基因.序列分析表明,TVBMV CP基因全长813nt,编码271个氨基酸；与GenBank中已报道的9个分离CP基因相比,其核苷酸及氨基酸序列同源性分别为90.28％-98.15％和97.05 ％-100％.将TVBMV CP基因经Bam HI/ NotI双酶切定向插入到pET30a载体中,构建了原核表达载体pET30-TVBMV CP,重组质粒经BamHI和NotI双酶切鉴定及基因测序验证正确后,用IPTG进行诱导表达.结果表明:TVBMV CP在大肠杆菌中获得了高效表达,表达产物的分子量为37 kD.用表达产物为抗原免疫家兔制备了特异性抗血清,其效价为1/2048.用Western-blot检测田间样品,其结果表明,制备的抗血清可用于检测田间的发病植株.
根據煙草脈帶花葉病毒(TVBMV)CP序列閤成上下遊引物,利用RT-PCR方法穫得瞭(TVBMV)CP基因.序列分析錶明,TVBMV CP基因全長813nt,編碼271箇氨基痠；與GenBank中已報道的9箇分離CP基因相比,其覈苷痠及氨基痠序列同源性分彆為90.28％-98.15％和97.05 ％-100％.將TVBMV CP基因經Bam HI/ NotI雙酶切定嚮插入到pET30a載體中,構建瞭原覈錶達載體pET30-TVBMV CP,重組質粒經BamHI和NotI雙酶切鑒定及基因測序驗證正確後,用IPTG進行誘導錶達.結果錶明:TVBMV CP在大腸桿菌中穫得瞭高效錶達,錶達產物的分子量為37 kD.用錶達產物為抗原免疫傢兔製備瞭特異性抗血清,其效價為1/2048.用Western-blot檢測田間樣品,其結果錶明,製備的抗血清可用于檢測田間的髮病植株.
근거연초맥대화협병독(TVBMV)CP서렬합성상하유인물,이용RT-PCR방법획득료(TVBMV)CP기인.서렬분석표명,TVBMV CP기인전장813nt,편마271개안기산；여GenBank중이보도적9개분리CP기인상비,기핵감산급안기산서렬동원성분별위90.28％-98.15％화97.05 ％-100％.장TVBMV CP기인경Bam HI/ NotI쌍매절정향삽입도pET30a재체중,구건료원핵표체재체pET30-TVBMV CP,중조질립경BamHI화NotI쌍매절감정급기인측서험증정학후,용IPTG진행유도표체.결과표명:TVBMV CP재대장간균중획득료고효표체,표체산물적분자량위37 kD.용표체산물위항원면역가토제비료특이성항혈청,기효개위1/2048.용Western-blot검측전간양품,기결과표명,제비적항혈청가용우검측전간적발병식주.
