生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2012年
2期
165-169
,共5页
董沁芳%郭瑶%汪平%程菊会%徐辉%丁先锋%郭江峰%姜永厚
董沁芳%郭瑤%汪平%程菊會%徐輝%丁先鋒%郭江峰%薑永厚
동심방%곽요%왕평%정국회%서휘%정선봉%곽강봉%강영후
LDR-PCR%猪细小病毒%条件优化%检测
LDR-PCR%豬細小病毒%條件優化%檢測
LDR-PCR%저세소병독%조건우화%검측
为准确特异灵敏地检测猪细小病毒( PPV),建立一种新的LDR-PCR方法.首先在病毒的保守区内设计一对LDR探针,LDR探针两端各连有一段引物对应序列,以连接产物为模板进行PCR,琼脂糖凝胶电泳检测结果.以标准质粒为模板,通过对LDR反应的退火温度、连接酶浓度及探针浓度等反应条件进行优化,确定了LDR最佳的反应体系,并建立了LDR-PCR方法.结果表明,可以特异地检测PPV,与猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒( PCV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)无交叉反应;最低检测限为102个拷贝.利用建立的方法对41例临床样本进行检测,14份样品PPV阳性,与普通PCR检测结果符合率为97.6％.
為準確特異靈敏地檢測豬細小病毒( PPV),建立一種新的LDR-PCR方法.首先在病毒的保守區內設計一對LDR探針,LDR探針兩耑各連有一段引物對應序列,以連接產物為模闆進行PCR,瓊脂糖凝膠電泳檢測結果.以標準質粒為模闆,通過對LDR反應的退火溫度、連接酶濃度及探針濃度等反應條件進行優化,確定瞭LDR最佳的反應體繫,併建立瞭LDR-PCR方法.結果錶明,可以特異地檢測PPV,與豬繁殖與呼吸障礙綜閤徵病毒(PRRSV)、豬瘟病毒(CSFV)、偽狂犬病毒(PRV)、豬圓環病毒( PCV)、豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)、豬流行性腹瀉病毒(PEDV)無交扠反應;最低檢測限為102箇拷貝.利用建立的方法對41例臨床樣本進行檢測,14份樣品PPV暘性,與普通PCR檢測結果符閤率為97.6％.
위준학특이령민지검측저세소병독( PPV),건립일충신적LDR-PCR방법.수선재병독적보수구내설계일대LDR탐침,LDR탐침량단각련유일단인물대응서렬,이련접산물위모판진행PCR,경지당응효전영검측결과.이표준질립위모판,통과대LDR반응적퇴화온도、련접매농도급탐침농도등반응조건진행우화,학정료LDR최가적반응체계,병건립료LDR-PCR방법.결과표명,가이특이지검측PPV,여저번식여호흡장애종합정병독(PRRSV)、저온병독(CSFV)、위광견병독(PRV)、저원배병독( PCV)、저전염성위장염병독(TGEV)、저류행성복사병독(PEDV)무교차반응;최저검측한위102개고패.이용건립적방법대41례림상양본진행검측,14빈양품PPV양성,여보통PCR검측결과부합솔위97.6％.
