肿瘤
腫瘤
종류
TUMOR
2006年
7期
623-627
,共5页
马艳春%朱明洁%张毅%胡晶莹%杨瑶琴%赵新泰
馬豔春%硃明潔%張毅%鬍晶瑩%楊瑤琴%趙新泰
마염춘%주명길%장의%호정형%양요금%조신태
抗肿瘤药%整合素αvβ3%抗体%基因表达%血管生成抑制药
抗腫瘤藥%整閤素αvβ3%抗體%基因錶達%血管生成抑製藥
항종류약%정합소αvβ3%항체%기인표체%혈관생성억제약
目的:构建抗人整合素β3亚基单链抗体(ScFv)基因,在大肠杆菌中表达并获得具有活性的ScFv.方法:从分泌抗人整合素β3亚基单抗(mAb)的杂交瘤细胞4F12中提取总RNA,RT-PCR扩增VH和VL基因,通过PCR在VH和VL基因间插入柔性连接子(Gly4Ser)3,并将其克隆至原核表达载体pQE中,获得含β3抗体基因的高效表达载体pQE-β3-ScFv.将重组子转化大肠杆菌M15后诱导表达,并对表达产物进行纯化和凝胶柱上在位复性.结果:获得抗β3单抗的VH和VL基因,构建了pQE-β3-ScFv,并在大肠杆菌中获得了表达,表达蛋白相对分子质量约为26×103,以包涵体形式存在,纯化和复性后,ELISA证实其具有良好的抗原结合活性.结论:成功构建、表达了抗人整合素β3亚基的ScFv基因,并获得了有活性的ScFv.
目的:構建抗人整閤素β3亞基單鏈抗體(ScFv)基因,在大腸桿菌中錶達併穫得具有活性的ScFv.方法:從分泌抗人整閤素β3亞基單抗(mAb)的雜交瘤細胞4F12中提取總RNA,RT-PCR擴增VH和VL基因,通過PCR在VH和VL基因間插入柔性連接子(Gly4Ser)3,併將其剋隆至原覈錶達載體pQE中,穫得含β3抗體基因的高效錶達載體pQE-β3-ScFv.將重組子轉化大腸桿菌M15後誘導錶達,併對錶達產物進行純化和凝膠柱上在位複性.結果:穫得抗β3單抗的VH和VL基因,構建瞭pQE-β3-ScFv,併在大腸桿菌中穫得瞭錶達,錶達蛋白相對分子質量約為26×103,以包涵體形式存在,純化和複性後,ELISA證實其具有良好的抗原結閤活性.結論:成功構建、錶達瞭抗人整閤素β3亞基的ScFv基因,併穫得瞭有活性的ScFv.
목적:구건항인정합소β3아기단련항체(ScFv)기인,재대장간균중표체병획득구유활성적ScFv.방법:종분비항인정합소β3아기단항(mAb)적잡교류세포4F12중제취총RNA,RT-PCR확증VH화VL기인,통과PCR재VH화VL기인간삽입유성련접자(Gly4Ser)3,병장기극륭지원핵표체재체pQE중,획득함β3항체기인적고효표체재체pQE-β3-ScFv.장중조자전화대장간균M15후유도표체,병대표체산물진행순화화응효주상재위복성.결과:획득항β3단항적VH화VL기인,구건료pQE-β3-ScFv,병재대장간균중획득료표체,표체단백상대분자질량약위26×103,이포함체형식존재,순화화복성후,ELISA증실기구유량호적항원결합활성.결론:성공구건、표체료항인정합소β3아기적ScFv기인,병획득료유활성적ScFv.
