分子植物育种
分子植物育種
분자식물육충
MOLECULAR PLANT BREEDING
2008年
1期
170-176
,共7页
吴鑫%雷天刚%何永睿%刘小丰%许兰珍%彭爱红%陈善春
吳鑫%雷天剛%何永睿%劉小豐%許蘭珍%彭愛紅%陳善春
오흠%뢰천강%하영예%류소봉%허란진%팽애홍%진선춘
柑桔%SRAP%ISSR%建立%优化
柑桔%SRAP%ISSR%建立%優化
감길%SRAP%ISSR%건립%우화
通过对PCR反应程序、反应体系(DNA模板量、PCR反应体积、Mg2+浓度、dNTP浓度、Taq酶用量、引物量)、电泳检测方法的系统优化,建立了柑桔SRAP-PCR和ISSR-PCR体系;以此进行大规模引物筛选,从而建立了柑桔SRAP和ISSR分子标记技术体系.SRAP-PCR:25μL体系,模板DNA25ng,Tris-HCl10 mmol/L,KCl50 mmol/L,Mg2+1.2 mmol/L,dNTP 120 μmol/L,Taq酶1.5U,引物0.4μmol/L,反应程序为94℃预变性5min,35个循环(94℃ 30s,47℃ 1min,72℃ 1min),72℃延伸10min;ISSR-PCR:25μL体系,模板DNA25ng,Tris-HCl10mmol/L,KCl50mmol/L,Mg2+1.6 mmol/L,dNTP200μmol/L,Taq酶1 U,引物0.8μmol/L.筛选出稳定性好、多态性高的24对SRAP引物和13条ISSR引物.
通過對PCR反應程序、反應體繫(DNA模闆量、PCR反應體積、Mg2+濃度、dNTP濃度、Taq酶用量、引物量)、電泳檢測方法的繫統優化,建立瞭柑桔SRAP-PCR和ISSR-PCR體繫;以此進行大規模引物篩選,從而建立瞭柑桔SRAP和ISSR分子標記技術體繫.SRAP-PCR:25μL體繫,模闆DNA25ng,Tris-HCl10 mmol/L,KCl50 mmol/L,Mg2+1.2 mmol/L,dNTP 120 μmol/L,Taq酶1.5U,引物0.4μmol/L,反應程序為94℃預變性5min,35箇循環(94℃ 30s,47℃ 1min,72℃ 1min),72℃延伸10min;ISSR-PCR:25μL體繫,模闆DNA25ng,Tris-HCl10mmol/L,KCl50mmol/L,Mg2+1.6 mmol/L,dNTP200μmol/L,Taq酶1 U,引物0.8μmol/L.篩選齣穩定性好、多態性高的24對SRAP引物和13條ISSR引物.
통과대PCR반응정서、반응체계(DNA모판량、PCR반응체적、Mg2+농도、dNTP농도、Taq매용량、인물량)、전영검측방법적계통우화,건립료감길SRAP-PCR화ISSR-PCR체계;이차진행대규모인물사선,종이건립료감길SRAP화ISSR분자표기기술체계.SRAP-PCR:25μL체계,모판DNA25ng,Tris-HCl10 mmol/L,KCl50 mmol/L,Mg2+1.2 mmol/L,dNTP 120 μmol/L,Taq매1.5U,인물0.4μmol/L,반응정서위94℃예변성5min,35개순배(94℃ 30s,47℃ 1min,72℃ 1min),72℃연신10min;ISSR-PCR:25μL체계,모판DNA25ng,Tris-HCl10mmol/L,KCl50mmol/L,Mg2+1.6 mmol/L,dNTP200μmol/L,Taq매1 U,인물0.8μmol/L.사선출은정성호、다태성고적24대SRAP인물화13조ISSR인물.
