卒中与神经疾病
卒中與神經疾病
졸중여신경질병
2009年
2期
67-70,82
,共5页
黄金莎%郝丽君%熊念%王涛%曹学兵%梁直厚%孙圣刚
黃金莎%郝麗君%熊唸%王濤%曹學兵%樑直厚%孫聖剛
황금사%학려군%웅념%왕도%조학병%량직후%손골강
帕金森病%3-X酸甘油醛脱氢酶%RNA干扰%线粒体膜电位
帕金森病%3-X痠甘油醛脫氫酶%RNA榦擾%線粒體膜電位
파금삼병%3-X산감유철탈경매%RNA간우%선립체막전위
目的 研究RNA干扰(RNAi)技术能否有效抑制三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)的表达以及对鱼藤酮所致神经毒性的影响.方法 体外化学合成针对GAPDH基因的小干扰RNA(siRNA),通过脂质体Lipofectamine 2000瞬时转染后采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)和蛋白免疫印迹分析(Western blot)进行干扰效果的鉴定;使用激光共聚焦荧光显微镜观察干扰对鱼藤酮诱导的GAPDH定位和结构改变的影响;用流式细胞仪检测线粒体膜电位变化.结果 实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹分析显示,化学合成的siRNA可有效抑制细胞内GAPDH mRNA和蛋白水平的表达;激光共聚焦荧光显微镜观察显示,干扰GAPDH表达的细胞可减少鱼藤酮所致的GAPDH的聚集及核转位;流式细胞仪检测发现干扰GAPDH的表达可部分抵抗鱼藤酮所致的细胞线粒体膜电位的下降.结论 下调GAPDH的表达可以减少鱼藤酮所致的细胞内GAPDH的聚集和核转位,减少线粒体膜电位的下降,提示GAPDH可能是鱼藤酮所致神经毒性的重要分子靶点.
目的 研究RNA榦擾(RNAi)技術能否有效抑製三燐痠甘油醛脫氫酶(GAPDH)的錶達以及對魚籐酮所緻神經毒性的影響.方法 體外化學閤成針對GAPDH基因的小榦擾RNA(siRNA),通過脂質體Lipofectamine 2000瞬時轉染後採用實時熒光定量PCR(real-time PCR)和蛋白免疫印跡分析(Western blot)進行榦擾效果的鑒定;使用激光共聚焦熒光顯微鏡觀察榦擾對魚籐酮誘導的GAPDH定位和結構改變的影響;用流式細胞儀檢測線粒體膜電位變化.結果 實時熒光定量PCR及蛋白免疫印跡分析顯示,化學閤成的siRNA可有效抑製細胞內GAPDH mRNA和蛋白水平的錶達;激光共聚焦熒光顯微鏡觀察顯示,榦擾GAPDH錶達的細胞可減少魚籐酮所緻的GAPDH的聚集及覈轉位;流式細胞儀檢測髮現榦擾GAPDH的錶達可部分牴抗魚籐酮所緻的細胞線粒體膜電位的下降.結論 下調GAPDH的錶達可以減少魚籐酮所緻的細胞內GAPDH的聚集和覈轉位,減少線粒體膜電位的下降,提示GAPDH可能是魚籐酮所緻神經毒性的重要分子靶點.
목적 연구RNA간우(RNAi)기술능부유효억제삼린산감유철탈경매(GAPDH)적표체이급대어등동소치신경독성적영향.방법 체외화학합성침대GAPDH기인적소간우RNA(siRNA),통과지질체Lipofectamine 2000순시전염후채용실시형광정량PCR(real-time PCR)화단백면역인적분석(Western blot)진행간우효과적감정;사용격광공취초형광현미경관찰간우대어등동유도적GAPDH정위화결구개변적영향;용류식세포의검측선립체막전위변화.결과 실시형광정량PCR급단백면역인적분석현시,화학합성적siRNA가유효억제세포내GAPDH mRNA화단백수평적표체;격광공취초형광현미경관찰현시,간우GAPDH표체적세포가감소어등동소치적GAPDH적취집급핵전위;류식세포의검측발현간우GAPDH적표체가부분저항어등동소치적세포선립체막전위적하강.결론 하조GAPDH적표체가이감소어등동소치적세포내GAPDH적취집화핵전위,감소선립체막전위적하강,제시GAPDH가능시어등동소치신경독성적중요분자파점.
