CAJ | 학술논문

目的运用SMART 技术,构建了五指山小型猪外周血白细胞cDNA文库.方法用RNAiso reagent(TaKaRa)处理新鲜血液,以总RNA抽提试剂盒(上海华舜) 制备总RNA.用Powerscript TM 反转录酶逆转录合成第一链cDNA,LD-PCR扩增获得cDNA双链,Sfi I酶切和CHROMA SPIN-400TM柱分离后,500 bp以上的片段与pDNR-LIB载体连接,电转化入E.coli.DH5α,建成原始文库.然后,扩增文库并随机挑取单菌落,PCR鉴定重组子插入片段大小.结果经鉴定,库容量达到1.5×106克隆,原始文库滴度为9.7×109 cfu/mL,扩增后的文库滴度为6.4 ×1010 cfu/mL.重组率接近100%,插入片段大小为0.5～2 kb,平均长度约为1.1 kb.结论构建的五指山小型猪外周血白细胞cDNA文库符合建库要求,可以用于全长cDNA 的筛选.为五指山小型猪新基因的获得及结构和功能研究提供了可靠材料.
목적 운용SMART 기술,구건료오지산소형저외주혈백세포cDNA문고.방법 용RNAiso reagent(TaKaRa)처리신선혈액,이총RNA추제시제합(상해화순) 제비총RNA.용Powerscript TM 반전록매역전록합성제일련cDNA,LD-PCR확증획득cDNA쌍련,Sfi I매절화CHROMA SPIN-400TM주분리후,500 bp이상적편단여pDNR-LIB재체련접,전전화입E.coli.DH5α,건성원시문고.연후,확증문고병수궤도취단균락,PCR감정중조자삽입편단대소.결과 경감정,고용량체도1.5×106극륭,원시문고적도위9.7×109 cfu/mL,확증후적문고적도위6.4 ×1010 cfu/mL.중조솔접근100%,삽입편단대소위0.5～2 kb,평균장도약위1.1 kb.결론 구건적오지산소형저외주혈백세포cDNA문고부합건고요구,가이용우전장cDNA 적사선.위오지산소형저신기인적획득급결구화공능연구제공료가고재료.