安徽医科大学学报
安徽醫科大學學報
안휘의과대학학보
ACTA UNIVERSITY MEDICINALIS ANHUI
2009年
6期
665-669
,共5页
王法财%王海萍%李琪%方圣云%沈玉先
王法財%王海萍%李琪%方聖雲%瀋玉先
왕법재%왕해평%리기%방골운%침옥선
抗体%单克隆/分离和提纯
抗體%單剋隆/分離和提純
항체%단극륭/분리화제순
目的 制备抗人ARMET(arginine-rich,mutated in early stage of tumors)的单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性.方法 将pET28a-ARMET转化到大肠杆菌BL21中,然后用IPTG诱导表达,用预装好的Ni-beads柱进行纯化,通过SDS-PAGE电泳及考玛斯亮蓝染色方法 判断融合蛋白的表达量及纯度.将纯化的ARMET免疫雌性BALB/c小鼠后采用淋巴细胞杂交瘤技术,获取分泌抗ARMET杂交瘤细胞株.体内诱生腹水法制备mAb,间接ELISA法测定其效价及抗体亚型,辛酸-硫酸铵沉淀法及亲和层析法纯化mAb.用免疫荧光双标及Western blot法对抗体的特异性进行了鉴定.结果获得了纯度较高、浓度较高的融合蛋白;建立了7株稳定分泌特异性抗ARMET mAb的杂交瘤细胞株,诱生腹水法获得的抗体效价在1×10-5～1×10-7之间.且均有较好的特异性.结论 已成功制备出抗ARMET mAb,为进一步用于临床诊断和实验研究奠定了基础.
目的 製備抗人ARMET(arginine-rich,mutated in early stage of tumors)的單剋隆抗體(mAb),併鑒定其特性.方法 將pET28a-ARMET轉化到大腸桿菌BL21中,然後用IPTG誘導錶達,用預裝好的Ni-beads柱進行純化,通過SDS-PAGE電泳及攷瑪斯亮藍染色方法 判斷融閤蛋白的錶達量及純度.將純化的ARMET免疫雌性BALB/c小鼠後採用淋巴細胞雜交瘤技術,穫取分泌抗ARMET雜交瘤細胞株.體內誘生腹水法製備mAb,間接ELISA法測定其效價及抗體亞型,辛痠-硫痠銨沉澱法及親和層析法純化mAb.用免疫熒光雙標及Western blot法對抗體的特異性進行瞭鑒定.結果穫得瞭純度較高、濃度較高的融閤蛋白;建立瞭7株穩定分泌特異性抗ARMET mAb的雜交瘤細胞株,誘生腹水法穫得的抗體效價在1×10-5～1×10-7之間.且均有較好的特異性.結論 已成功製備齣抗ARMET mAb,為進一步用于臨床診斷和實驗研究奠定瞭基礎.
목적 제비항인ARMET(arginine-rich,mutated in early stage of tumors)적단극륭항체(mAb),병감정기특성.방법 장pET28a-ARMET전화도대장간균BL21중,연후용IPTG유도표체,용예장호적Ni-beads주진행순화,통과SDS-PAGE전영급고마사량람염색방법 판단융합단백적표체량급순도.장순화적ARMET면역자성BALB/c소서후채용림파세포잡교류기술,획취분비항ARMET잡교류세포주.체내유생복수법제비mAb,간접ELISA법측정기효개급항체아형,신산-류산안침정법급친화층석법순화mAb.용면역형광쌍표급Western blot법대항체적특이성진행료감정.결과획득료순도교고、농도교고적융합단백;건립료7주은정분비특이성항ARMET mAb적잡교류세포주,유생복수법획득적항체효개재1×10-5～1×10-7지간.차균유교호적특이성.결론 이성공제비출항ARMET mAb,위진일보용우림상진단화실험연구전정료기출.
