微生物与感染
微生物與感染
미생물여감염
JOURNAL OF MICROBES AND INFECTION
2010年
1期
26-30
,共5页
王亚琳%张湘燕%王压娣%车小燕%郭晓奎
王亞琳%張湘燕%王壓娣%車小燕%郭曉奎
왕아림%장상연%왕압제%차소연%곽효규
钩端螺旋体%LipL32%单克隆抗体%酶联免疫吸附试验
鉤耑螺鏇體%LipL32%單剋隆抗體%酶聯免疫吸附試驗
구단라선체%LipL32%단극륭항체%매련면역흡부시험
LipL32是钩端螺旋体外膜中含量最丰富的蛋白,有很好的免疫原性,且在致病性钩端螺旋体中高度保守.在非变性条件下纯化LipL32重组蛋白,与佐剂混匀后免疫BALB/c小鼠,取脾脏细胞与NS-1骨髓瘤细胞融合,然后用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和有限稀释法分别进行筛选和细胞克隆,获得29株能稳定分泌抗LipL32单克隆抗体的杂交瘤细胞株,它们能识别8个LipL32抗原表位.用这些细胞株制备腹水型抗体,并对特性进行鉴定.用生物素标记这些抗体后两两配对,采用双抗夹心ELISA检测提取自15株致病性钩端螺旋体及其他致病菌的抗原,以评估单克隆抗体的灵敏度和特异度.筛选出1对灵敏度高和特异度好的单克隆抗体,ELISA检测rLipL32的最低浓度为1ng/ml.结果提示,该钩端螺旋体外膜蛋白LipL32单克隆抗体及检测方法有很好的应用前景.
LipL32是鉤耑螺鏇體外膜中含量最豐富的蛋白,有很好的免疫原性,且在緻病性鉤耑螺鏇體中高度保守.在非變性條件下純化LipL32重組蛋白,與佐劑混勻後免疫BALB/c小鼠,取脾髒細胞與NS-1骨髓瘤細胞融閤,然後用間接酶聯免疫吸附試驗(ELISA)和有限稀釋法分彆進行篩選和細胞剋隆,穫得29株能穩定分泌抗LipL32單剋隆抗體的雜交瘤細胞株,它們能識彆8箇LipL32抗原錶位.用這些細胞株製備腹水型抗體,併對特性進行鑒定.用生物素標記這些抗體後兩兩配對,採用雙抗夾心ELISA檢測提取自15株緻病性鉤耑螺鏇體及其他緻病菌的抗原,以評估單剋隆抗體的靈敏度和特異度.篩選齣1對靈敏度高和特異度好的單剋隆抗體,ELISA檢測rLipL32的最低濃度為1ng/ml.結果提示,該鉤耑螺鏇體外膜蛋白LipL32單剋隆抗體及檢測方法有很好的應用前景.
LipL32시구단라선체외막중함량최봉부적단백,유흔호적면역원성,차재치병성구단라선체중고도보수.재비변성조건하순화LipL32중조단백,여좌제혼균후면역BALB/c소서,취비장세포여NS-1골수류세포융합,연후용간접매련면역흡부시험(ELISA)화유한희석법분별진행사선화세포극륭,획득29주능은정분비항LipL32단극륭항체적잡교류세포주,타문능식별8개LipL32항원표위.용저사세포주제비복수형항체,병대특성진행감정.용생물소표기저사항체후량량배대,채용쌍항협심ELISA검측제취자15주치병성구단라선체급기타치병균적항원,이평고단극륭항체적령민도화특이도.사선출1대령민도고화특이도호적단극륭항체,ELISA검측rLipL32적최저농도위1ng/ml.결과제시,해구단라선체외막단백LipL32단극륭항체급검측방법유흔호적응용전경.
