水生生物学报
水生生物學報
수생생물학보
ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA
2010年
4期
837-842
,共6页
廖莎%陈芸%杜富宽%汪亚平%廖兰杰%朱作言
廖莎%陳蕓%杜富寬%汪亞平%廖蘭傑%硃作言
료사%진예%두부관%왕아평%료란걸%주작언
RNA干扰%小发夹RNA%草鱼出血病病毒%转基因鱼
RNA榦擾%小髮夾RNA%草魚齣血病病毒%轉基因魚
RNA간우%소발협RNA%초어출혈병병독%전기인어
研究采用草鱼H1基因启动子,以草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)外衣壳蛋白VP7基因为靶基因,以增强型绿色荧光蛋白(eGFP)为报告基因,构建了3个小发卡RNA(shRNA)表达载体pHlsiGCRV(x)-CMVeGFP.CIK细胞感染实验表明,pHIsiGCRV2-CMVeGFP具有较高的病毒抑制作用.通过显微注射将pH1siGCRV2-CMVeGFP导入稀有(鮈)鲫(Gobiocypris rarus)受精卵,获得转基因稀有(鮈)鲫P0代群体.转基因稀有(鮈)鲫攻毒实验显示,转基因稀有(鮈)鲫死亡率为30%,抗草鱼出血病能力显著提高.进一步的实时荧光定量PCR检测证实,转基因稀有(鮈)鲫脾脏、后肠和肝脏中GCRV的含量显著低于对照鱼,并随着时间的延续逐渐减少,转基因稀有(鮈)鲫体内GCRV的复制受到有效抑制.研究为抗草鱼出血病转基因鱼育种奠定重要基础.
研究採用草魚H1基因啟動子,以草魚呼腸孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)外衣殼蛋白VP7基因為靶基因,以增彊型綠色熒光蛋白(eGFP)為報告基因,構建瞭3箇小髮卡RNA(shRNA)錶達載體pHlsiGCRV(x)-CMVeGFP.CIK細胞感染實驗錶明,pHIsiGCRV2-CMVeGFP具有較高的病毒抑製作用.通過顯微註射將pH1siGCRV2-CMVeGFP導入稀有(鮈)鯽(Gobiocypris rarus)受精卵,穫得轉基因稀有(鮈)鯽P0代群體.轉基因稀有(鮈)鯽攻毒實驗顯示,轉基因稀有(鮈)鯽死亡率為30%,抗草魚齣血病能力顯著提高.進一步的實時熒光定量PCR檢測證實,轉基因稀有(鮈)鯽脾髒、後腸和肝髒中GCRV的含量顯著低于對照魚,併隨著時間的延續逐漸減少,轉基因稀有(鮈)鯽體內GCRV的複製受到有效抑製.研究為抗草魚齣血病轉基因魚育種奠定重要基礎.
연구채용초어H1기인계동자,이초어호장고병독(Grass carp reovirus,GCRV)외의각단백VP7기인위파기인,이증강형록색형광단백(eGFP)위보고기인,구건료3개소발잡RNA(shRNA)표체재체pHlsiGCRV(x)-CMVeGFP.CIK세포감염실험표명,pHIsiGCRV2-CMVeGFP구유교고적병독억제작용.통과현미주사장pH1siGCRV2-CMVeGFP도입희유(구)즉(Gobiocypris rarus)수정란,획득전기인희유(구)즉P0대군체.전기인희유(구)즉공독실험현시,전기인희유(구)즉사망솔위30%,항초어출혈병능력현저제고.진일보적실시형광정량PCR검측증실,전기인희유(구)즉비장、후장화간장중GCRV적함량현저저우대조어,병수착시간적연속축점감소,전기인희유(구)즉체내GCRV적복제수도유효억제.연구위항초어출혈병전기인어육충전정중요기출.
