中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2010年
8期
1658-1661
,共4页
王跃春%李业霞%段阿林%李佳穗%郑乔丹
王躍春%李業霞%段阿林%李佳穗%鄭喬丹
왕약춘%리업하%단아림%리가수%정교단
脐带%间质干细胞%细胞分离
臍帶%間質榦細胞%細胞分離
제대%간질간세포%세포분리
目的:建立在一般实验条件下快速分离、纯化及冻存人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)的简便有效方法并研究其冻存复苏后的增殖及多向分化能力.方法:用胶原酶Ⅱ、胰蛋白酶次序消化及二步离心法从人的完整脐带中快速分离UC-MSCs,通过把握传代时的消化程度及酸化培养基来快速纯化UC-MSCs,以流式细胞仪检测表面抗原进行鉴定;用简易二步法(-4℃停留30 min,-20℃存放2 h,-80℃长期保存)冻存UC-MSCs,半年后复苏,扩增、传代,检测其胚胎干细胞特异性抗原Oct4、SSEA-4和人端粒酶逆转录酶hTERT的表达情况,并诱导其向神经元样细胞、成肌细胞和肝细胞样细胞分化.结果:通过双酶次序消化结合二步离心法,2 h可提取全脐带中的MSCs,原代培养7 d即可传代,通过适度消化传代和选用弱酸性培养基培养,第3代即可得到纯化的UC-MSCs,UC-MSCs表达CD29和CD44,不表达CD34和CD45,极低表达HLA-DR、CD80、CD86和CD106.简易法冻存半年后复苏的UC-MSCs表达Oct4、SSEA-4和hTERT,可向三个胚层来源的细胞分化.结论:双酶次序消化结合二步离心法是从人的完整脐带中快速分离UC-MSCs的一种简便有效方法,偏酸性环境有利于UC-MSCs的 扩增及纯化;简易二步法冻存对UC-MSCs增殖和多向分化能力没有明显影响.
目的:建立在一般實驗條件下快速分離、純化及凍存人臍帶間充質榦細胞(UC-MSCs)的簡便有效方法併研究其凍存複囌後的增殖及多嚮分化能力.方法:用膠原酶Ⅱ、胰蛋白酶次序消化及二步離心法從人的完整臍帶中快速分離UC-MSCs,通過把握傳代時的消化程度及痠化培養基來快速純化UC-MSCs,以流式細胞儀檢測錶麵抗原進行鑒定;用簡易二步法(-4℃停留30 min,-20℃存放2 h,-80℃長期保存)凍存UC-MSCs,半年後複囌,擴增、傳代,檢測其胚胎榦細胞特異性抗原Oct4、SSEA-4和人耑粒酶逆轉錄酶hTERT的錶達情況,併誘導其嚮神經元樣細胞、成肌細胞和肝細胞樣細胞分化.結果:通過雙酶次序消化結閤二步離心法,2 h可提取全臍帶中的MSCs,原代培養7 d即可傳代,通過適度消化傳代和選用弱痠性培養基培養,第3代即可得到純化的UC-MSCs,UC-MSCs錶達CD29和CD44,不錶達CD34和CD45,極低錶達HLA-DR、CD80、CD86和CD106.簡易法凍存半年後複囌的UC-MSCs錶達Oct4、SSEA-4和hTERT,可嚮三箇胚層來源的細胞分化.結論:雙酶次序消化結閤二步離心法是從人的完整臍帶中快速分離UC-MSCs的一種簡便有效方法,偏痠性環境有利于UC-MSCs的 擴增及純化;簡易二步法凍存對UC-MSCs增殖和多嚮分化能力沒有明顯影響.
목적:건립재일반실험조건하쾌속분리、순화급동존인제대간충질간세포(UC-MSCs)적간편유효방법병연구기동존복소후적증식급다향분화능력.방법:용효원매Ⅱ、이단백매차서소화급이보리심법종인적완정제대중쾌속분리UC-MSCs,통과파악전대시적소화정도급산화배양기래쾌속순화UC-MSCs,이류식세포의검측표면항원진행감정;용간역이보법(-4℃정류30 min,-20℃존방2 h,-80℃장기보존)동존UC-MSCs,반년후복소,확증、전대,검측기배태간세포특이성항원Oct4、SSEA-4화인단립매역전록매hTERT적표체정황,병유도기향신경원양세포、성기세포화간세포양세포분화.결과:통과쌍매차서소화결합이보리심법,2 h가제취전제대중적MSCs,원대배양7 d즉가전대,통과괄도소화전대화선용약산성배양기배양,제3대즉가득도순화적UC-MSCs,UC-MSCs표체CD29화CD44,불표체CD34화CD45,겁저표체HLA-DR、CD80、CD86화CD106.간역법동존반년후복소적UC-MSCs표체Oct4、SSEA-4화hTERT,가향삼개배층래원적세포분화.결론:쌍매차서소화결합이보리심법시종인적완정제대중쾌속분리UC-MSCs적일충간편유효방법,편산성배경유리우UC-MSCs적 확증급순화;간역이보법동존대UC-MSCs증식화다향분화능력몰유명현영향.
