郑州大学学报（医学版）
鄭州大學學報（醫學版）
정주대학학보（의학판）
JOURNAL OF ZHENGZHOU UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2011年
3期
396-398
,共3页
陈帅印%张荣光%范清堂%段广才
陳帥印%張榮光%範清堂%段廣纔
진수인%장영광%범청당%단엄재
幽门螺杆菌%ureB基因%乳酸乳球菌%食品级表达载体%条件优化
幽門螺桿菌%ureB基因%乳痠乳毬菌%食品級錶達載體%條件優化
유문라간균%ureB기인%유산유구균%식품급표체재체%조건우화
目的:以乳酸乳球菌(Lactococcus lactis,L.lactis)为宿主菌构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)尿素酶B(UreB)的食品级表达系统.方法:从重组质粒pMD19-T-ureB上酶切得到ureB基因片段,与含有筛选标记lacF基因的L.lactis表达载体pNZ8149经双酶切后定向连接,应用PCR、酶切和测序的方法鉴定重组子.重组菌用乳联菌肽诱导表达,用正交表实验进行表达条件的优化,通过SDS-PAGE和Western blot对重组蛋白进行鉴定.结果:重组菌Nz3900/pNz8149-ureB经鉴定与预期相符.优化结果显示在菌体培养到D600nm为0.40左右时加入终浓度为25μg/L的乳联菌肽诱导5 h产量最高,通过Western blot能检测到UreB的表达.结论:构建了ureB基因食品级表达系统,并得到了表达的最优条件.
目的:以乳痠乳毬菌(Lactococcus lactis,L.lactis)為宿主菌構建幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,H.pylori)尿素酶B(UreB)的食品級錶達繫統.方法:從重組質粒pMD19-T-ureB上酶切得到ureB基因片段,與含有篩選標記lacF基因的L.lactis錶達載體pNZ8149經雙酶切後定嚮連接,應用PCR、酶切和測序的方法鑒定重組子.重組菌用乳聯菌肽誘導錶達,用正交錶實驗進行錶達條件的優化,通過SDS-PAGE和Western blot對重組蛋白進行鑒定.結果:重組菌Nz3900/pNz8149-ureB經鑒定與預期相符.優化結果顯示在菌體培養到D600nm為0.40左右時加入終濃度為25μg/L的乳聯菌肽誘導5 h產量最高,通過Western blot能檢測到UreB的錶達.結論:構建瞭ureB基因食品級錶達繫統,併得到瞭錶達的最優條件.
목적:이유산유구균(Lactococcus lactis,L.lactis)위숙주균구건유문라간균(Helicobacter pylori,H.pylori)뇨소매B(UreB)적식품급표체계통.방법:종중조질립pMD19-T-ureB상매절득도ureB기인편단,여함유사선표기lacF기인적L.lactis표체재체pNZ8149경쌍매절후정향련접,응용PCR、매절화측서적방법감정중조자.중조균용유련균태유도표체,용정교표실험진행표체조건적우화,통과SDS-PAGE화Western blot대중조단백진행감정.결과:중조균Nz3900/pNz8149-ureB경감정여예기상부.우화결과현시재균체배양도D600nm위0.40좌우시가입종농도위25μg/L적유련균태유도5 h산량최고,통과Western blot능검측도UreB적표체.결론:구건료ureB기인식품급표체계통,병득도료표체적최우조건.
