农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2011年
3期
583-588
,共6页
于福先%陈晓宇%朱志伟%潘建治
于福先%陳曉宇%硃誌偉%潘建治
우복선%진효우%주지위%반건치
慢病毒载体%双荧光%病毒纯化%病毒效价
慢病毒載體%雙熒光%病毒純化%病毒效價
만병독재체%쌍형광%병독순화%병독효개
慢病毒表达载体具有感染宿主广和基因组整合效率高的优点,因此在转基因动物的制备中得到广泛应用.本研究构建了含有红色荧光和绿色荧光的慢病毒表达载体,用磷酸钙转染法将三质粒慢病毒载体转染293T细胞,转染效率达72%,降低了慢病毒的生产成本.在进行慢病毒的浓缩与纯化时,通过超速度离心和超滤相结合的方法,在150 mL的慢病毒原液中经纯化后得到80 μL效价为2.38×109 TU/mL的慢病毒颗粒.获得的高效价双荧光慢病毒表达载体可为后续双基因转基因动物的制备提供可靠的制作途径与检测基础.
慢病毒錶達載體具有感染宿主廣和基因組整閤效率高的優點,因此在轉基因動物的製備中得到廣汎應用.本研究構建瞭含有紅色熒光和綠色熒光的慢病毒錶達載體,用燐痠鈣轉染法將三質粒慢病毒載體轉染293T細胞,轉染效率達72%,降低瞭慢病毒的生產成本.在進行慢病毒的濃縮與純化時,通過超速度離心和超濾相結閤的方法,在150 mL的慢病毒原液中經純化後得到80 μL效價為2.38×109 TU/mL的慢病毒顆粒.穫得的高效價雙熒光慢病毒錶達載體可為後續雙基因轉基因動物的製備提供可靠的製作途徑與檢測基礎.
만병독표체재체구유감염숙주엄화기인조정합효솔고적우점,인차재전기인동물적제비중득도엄범응용.본연구구건료함유홍색형광화록색형광적만병독표체재체,용린산개전염법장삼질립만병독재체전염293T세포,전염효솔체72%,강저료만병독적생산성본.재진행만병독적농축여순화시,통과초속도리심화초려상결합적방법,재150 mL적만병독원액중경순화후득도80 μL효개위2.38×109 TU/mL적만병독과립.획득적고효개쌍형광만병독표체재체가위후속쌍기인전기인동물적제비제공가고적제작도경여검측기출.
