畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2011年
6期
772-778
,共7页
秦玉蓉%许峰%田智泉%高波%张振韬%阴彦辉%孙敏%李碧春
秦玉蓉%許峰%田智泉%高波%張振韜%陰彥輝%孫敏%李碧春
진옥용%허봉%전지천%고파%장진도%음언휘%손민%리벽춘
脂蛋白酯酶基因%真核表达%NIH-3T3细胞%绿色荧光蛋白
脂蛋白酯酶基因%真覈錶達%NIH-3T3細胞%綠色熒光蛋白
지단백지매기인%진핵표체%NIH-3T3세포%록색형광단백
旨在克隆徐淮山羊脂蛋白酯酶(LPL)基因的cDNA,并通过EGFP融合蛋白实现该基因亚细胞水平的表达定位.本研究通过RT-PCR方法克隆徐淮山羊LPL基因cDNA,并初步进行生物信息学分析,构建含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的融合表达载体pEGFP-C1-LPL.聚乙烯亚胺(PEI)介导pEGFP-C1-LPL转染NIH-3T3细胞,48 h后在荧光倒置显微镜下观察,并用RT-PCR方法检测LPL mRNA在细胞内的表达.结果,成功克隆出山羊LPL基因1 530 bp长的cDNA,完整阅读框大小为1437 bp,共编码478个氨基酸,GenBank登录号为GU082383.信号肽区域预测结果表明LPL蛋白含有一小段信号肽序列,其可能性为100%.信号肽酶切割位置在第23和24个氨基酸之间,其可能性达到65.9%.成功构建融合表达载体pEGFP-C1-LPL,并且RT-PCR显示转染后LPL在mRNA水平上表达明显.EGFP-LPL融合蛋白定位在NIT-3T3细胞外和细胞膜部分.结果表明,首次成功克隆出徐淮山羊LPL基因cDNA;重组质粒pEGFP-C1-LPL构建成功,并在NIH-3T3细胞中明显表达.
旨在剋隆徐淮山羊脂蛋白酯酶(LPL)基因的cDNA,併通過EGFP融閤蛋白實現該基因亞細胞水平的錶達定位.本研究通過RT-PCR方法剋隆徐淮山羊LPL基因cDNA,併初步進行生物信息學分析,構建含有增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)報告基因的融閤錶達載體pEGFP-C1-LPL.聚乙烯亞胺(PEI)介導pEGFP-C1-LPL轉染NIH-3T3細胞,48 h後在熒光倒置顯微鏡下觀察,併用RT-PCR方法檢測LPL mRNA在細胞內的錶達.結果,成功剋隆齣山羊LPL基因1 530 bp長的cDNA,完整閱讀框大小為1437 bp,共編碼478箇氨基痠,GenBank登錄號為GU082383.信號肽區域預測結果錶明LPL蛋白含有一小段信號肽序列,其可能性為100%.信號肽酶切割位置在第23和24箇氨基痠之間,其可能性達到65.9%.成功構建融閤錶達載體pEGFP-C1-LPL,併且RT-PCR顯示轉染後LPL在mRNA水平上錶達明顯.EGFP-LPL融閤蛋白定位在NIT-3T3細胞外和細胞膜部分.結果錶明,首次成功剋隆齣徐淮山羊LPL基因cDNA;重組質粒pEGFP-C1-LPL構建成功,併在NIH-3T3細胞中明顯錶達.
지재극륭서회산양지단백지매(LPL)기인적cDNA,병통과EGFP융합단백실현해기인아세포수평적표체정위.본연구통과RT-PCR방법극륭서회산양LPL기인cDNA,병초보진행생물신식학분석,구건함유증강형록색형광단백(EGFP)보고기인적융합표체재체pEGFP-C1-LPL.취을희아알(PEI)개도pEGFP-C1-LPL전염NIH-3T3세포,48 h후재형광도치현미경하관찰,병용RT-PCR방법검측LPL mRNA재세포내적표체.결과,성공극륭출산양LPL기인1 530 bp장적cDNA,완정열독광대소위1437 bp,공편마478개안기산,GenBank등록호위GU082383.신호태구역예측결과표명LPL단백함유일소단신호태서렬,기가능성위100%.신호태매절할위치재제23화24개안기산지간,기가능성체도65.9%.성공구건융합표체재체pEGFP-C1-LPL,병차RT-PCR현시전염후LPL재mRNA수평상표체명현.EGFP-LPL융합단백정위재NIT-3T3세포외화세포막부분.결과표명,수차성공극륭출서회산양LPL기인cDNA;중조질립pEGFP-C1-LPL구건성공,병재NIH-3T3세포중명현표체.
