中南医学科学杂志
中南醫學科學雜誌
중남의학과학잡지
JOURNAL OF UNIVERSITY OF SOUTH CHINA(MEDICAL EDITION)
2011年
5期
501-503,506
,共4页
屈巾力%李薇%龙敏芝%苏贤%许骞%唐双阳%陈熙
屈巾力%李薇%龍敏芝%囌賢%許鶱%唐雙暘%陳熙
굴건력%리미%룡민지%소현%허건%당쌍양%진희
人乳头瘤病毒16型(HPV16)%E5%表达
人乳頭瘤病毒16型(HPV16)%E5%錶達
인유두류병독16형(HPV16)%E5%표체
目的 构建人乳头瘤病毒16型(HPV16)E5蛋白真核表达载体pcDNA3.1(+)/HPV16 E5,分析E5在HeLa细胞及BALB/c小鼠肌肉组织中的表达.方法 设计HPV16 E5基因引物,PCR扩增E5基因,经BamHI、EcoRI酶切后将其连接入pcDNA3.1(+),PCR及双酶切筛选阳性克隆并测序.将构建的pcDNA3.1(+)/HPV16 E5转染HeLa细胞,利用RT-PCR测定HPV16 E5 mRNA表达.将6只BALB/c小鼠分为3组,分别取100 mg pcDNA3.1(+)/HPV16 E5、100 mg pcDNA3.1(+)、100 mL PBS经肌肉注射小鼠,2周1次,共4次；末次接种后第14天取小鼠股四头肌制成石蜡切片,免疫组织化学法检测E5蛋白在小鼠肌肉组织中的表达.结果 PCR扩增得到252 bp HPV16E5基因片段,DNA测序结果显示E5基因片段正确地连入pcDNA3.1(+).构建的pcDNA3.1(+)/HPV16 E5在HeLa细胞表达大小为252bp的HPV16 E5 mRNA.小鼠股四头肌细胞膜被染成棕黄色.结论 构建的真核表达载体pcDNA3.1(+)/HPV16 E5能在HeLa细胞及小鼠肌肉组织中表达HPV16 E5蛋白.
目的 構建人乳頭瘤病毒16型(HPV16)E5蛋白真覈錶達載體pcDNA3.1(+)/HPV16 E5,分析E5在HeLa細胞及BALB/c小鼠肌肉組織中的錶達.方法 設計HPV16 E5基因引物,PCR擴增E5基因,經BamHI、EcoRI酶切後將其連接入pcDNA3.1(+),PCR及雙酶切篩選暘性剋隆併測序.將構建的pcDNA3.1(+)/HPV16 E5轉染HeLa細胞,利用RT-PCR測定HPV16 E5 mRNA錶達.將6隻BALB/c小鼠分為3組,分彆取100 mg pcDNA3.1(+)/HPV16 E5、100 mg pcDNA3.1(+)、100 mL PBS經肌肉註射小鼠,2週1次,共4次；末次接種後第14天取小鼠股四頭肌製成石蠟切片,免疫組織化學法檢測E5蛋白在小鼠肌肉組織中的錶達.結果 PCR擴增得到252 bp HPV16E5基因片段,DNA測序結果顯示E5基因片段正確地連入pcDNA3.1(+).構建的pcDNA3.1(+)/HPV16 E5在HeLa細胞錶達大小為252bp的HPV16 E5 mRNA.小鼠股四頭肌細胞膜被染成棕黃色.結論 構建的真覈錶達載體pcDNA3.1(+)/HPV16 E5能在HeLa細胞及小鼠肌肉組織中錶達HPV16 E5蛋白.
목적 구건인유두류병독16형(HPV16)E5단백진핵표체재체pcDNA3.1(+)/HPV16 E5,분석E5재HeLa세포급BALB/c소서기육조직중적표체.방법 설계HPV16 E5기인인물,PCR확증E5기인,경BamHI、EcoRI매절후장기련접입pcDNA3.1(+),PCR급쌍매절사선양성극륭병측서.장구건적pcDNA3.1(+)/HPV16 E5전염HeLa세포,이용RT-PCR측정HPV16 E5 mRNA표체.장6지BALB/c소서분위3조,분별취100 mg pcDNA3.1(+)/HPV16 E5、100 mg pcDNA3.1(+)、100 mL PBS경기육주사소서,2주1차,공4차；말차접충후제14천취소서고사두기제성석사절편,면역조직화학법검측E5단백재소서기육조직중적표체.결과 PCR확증득도252 bp HPV16E5기인편단,DNA측서결과현시E5기인편단정학지련입pcDNA3.1(+).구건적pcDNA3.1(+)/HPV16 E5재HeLa세포표체대소위252bp적HPV16 E5 mRNA.소서고사두기세포막피염성종황색.결론 구건적진핵표체재체pcDNA3.1(+)/HPV16 E5능재HeLa세포급소서기육조직중표체HPV16 E5단백.
