现代肿瘤医学
現代腫瘤醫學
현대종류의학
JOURNAL OF MODERN ONCOLOGY
2012年
4期
679-681
,共3页
赵征%刘志刚%雷光焰%党诚学%廖子君%陆建荣%王云梅%苏智祥
趙徵%劉誌剛%雷光燄%黨誠學%廖子君%陸建榮%王雲梅%囌智祥
조정%류지강%뢰광염%당성학%료자군%륙건영%왕운매%소지상
G蛋白偶联受体30%乳腺癌耐药%RNA干扰
G蛋白偶聯受體30%乳腺癌耐藥%RNA榦擾
G단백우련수체30%유선암내약%RNA간우
目的:采用 RNA干扰(RNAi)技术研究耐药乳腺癌细胞MCF -7R中GPR30表达方法:利用他莫昔芬( tamoxifen,TAM)诱导乳腺癌细胞MCF -7建立耐药乳腺癌细胞株.以GPR30为靶基因,pGenSil -1质粒为载体,根批GenBank数据库提供的GPR30基因核苷酸序列,克隆到空载体pGenSil -1中,Lipofectin2000转染MCF-7R细胞,G418筛选获得阳性克隆细胞扩大培养.Tnzol法提取细胞总RNA,半定量RT - PCR检测GPR30的表达.结果:经TAM处理可以诱导GPR30 mRNA的表达,HindⅢ和EcoRⅠ双酶切鉴定重组干扰载体pGg30-1、pGg30 -2得到了与预期大小相符的片段,RT - PCR显示,未转染组MCF - 7R细胞GPR30mRNA的表达量明显高于转染pGg30 -1、pGg30-2的MCF - 7R细胞,而转染空载体组细胞未见明显变化.结论:RNAi技术可成功构建抑制GPR30表达的小干扰RNA重组体.
目的:採用 RNA榦擾(RNAi)技術研究耐藥乳腺癌細胞MCF -7R中GPR30錶達方法:利用他莫昔芬( tamoxifen,TAM)誘導乳腺癌細胞MCF -7建立耐藥乳腺癌細胞株.以GPR30為靶基因,pGenSil -1質粒為載體,根批GenBank數據庫提供的GPR30基因覈苷痠序列,剋隆到空載體pGenSil -1中,Lipofectin2000轉染MCF-7R細胞,G418篩選穫得暘性剋隆細胞擴大培養.Tnzol法提取細胞總RNA,半定量RT - PCR檢測GPR30的錶達.結果:經TAM處理可以誘導GPR30 mRNA的錶達,HindⅢ和EcoRⅠ雙酶切鑒定重組榦擾載體pGg30-1、pGg30 -2得到瞭與預期大小相符的片段,RT - PCR顯示,未轉染組MCF - 7R細胞GPR30mRNA的錶達量明顯高于轉染pGg30 -1、pGg30-2的MCF - 7R細胞,而轉染空載體組細胞未見明顯變化.結論:RNAi技術可成功構建抑製GPR30錶達的小榦擾RNA重組體.
목적:채용 RNA간우(RNAi)기술연구내약유선암세포MCF -7R중GPR30표체방법:이용타막석분( tamoxifen,TAM)유도유선암세포MCF -7건립내약유선암세포주.이GPR30위파기인,pGenSil -1질립위재체,근비GenBank수거고제공적GPR30기인핵감산서렬,극륭도공재체pGenSil -1중,Lipofectin2000전염MCF-7R세포,G418사선획득양성극륭세포확대배양.Tnzol법제취세포총RNA,반정량RT - PCR검측GPR30적표체.결과:경TAM처리가이유도GPR30 mRNA적표체,HindⅢ화EcoRⅠ쌍매절감정중조간우재체pGg30-1、pGg30 -2득도료여예기대소상부적편단,RT - PCR현시,미전염조MCF - 7R세포GPR30mRNA적표체량명현고우전염pGg30 -1、pGg30-2적MCF - 7R세포,이전염공재체조세포미견명현변화.결론:RNAi기술가성공구건억제GPR30표체적소간우RNA중조체.
