中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2004年
1期
88-93
,共6页
张海涛%朱振宇%吉琼梅%李秀英%李民友%马涧泉%梁念慈
張海濤%硃振宇%吉瓊梅%李秀英%李民友%馬澗泉%樑唸慈
장해도%주진우%길경매%리수영%리민우%마간천%량념자
死亡相关蛋白激酶%细胞凋亡%甲基化%Raji细胞%K562细胞
死亡相關蛋白激酶%細胞凋亡%甲基化%Raji細胞%K562細胞
사망상관단백격매%세포조망%갑기화%Raji세포%K562세포
目的:探讨死亡相关蛋白激酶(DAPK1)在肿瘤的形成、转移中所起作用,克隆DAPK1基因的开放读码序列(ORF).方法:根据GenBank提供的核苷酸序列,自行设计引物,用RT-PCR从K562细胞中扩增DAPK1基因的ORF;用质脂体将pcDNA3.1(+)-DAPK1转染到Raji细胞,Hoechst 33258染色观察细胞凋亡,MTT法观察DAPK1基因对细胞生存的影响.结果:DAPK1基因的ORF克隆到质粒pMD18-T,测序鉴定;分析结果显示,从K562细胞成功扩增 4 300 bp的DAPK1基因ORF有7处突变,其中6处是同义突变,1处是基因的单链核苷酸多态性;DAPK1基因的ORF克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+),转化到Raji细胞;转染48 h后,可以检测到DAPK1的表达,并可以观察到细胞发生凋亡.结论:大片段的基因可以采用RT-PCR法直接克隆,采用常规的转染技术可以将大片段基因转染到宿主细胞;成功克隆具有活性功能DAPK1基因ORF,过表达的DAPK1基因可以诱导Raji细胞凋亡.
目的:探討死亡相關蛋白激酶(DAPK1)在腫瘤的形成、轉移中所起作用,剋隆DAPK1基因的開放讀碼序列(ORF).方法:根據GenBank提供的覈苷痠序列,自行設計引物,用RT-PCR從K562細胞中擴增DAPK1基因的ORF;用質脂體將pcDNA3.1(+)-DAPK1轉染到Raji細胞,Hoechst 33258染色觀察細胞凋亡,MTT法觀察DAPK1基因對細胞生存的影響.結果:DAPK1基因的ORF剋隆到質粒pMD18-T,測序鑒定;分析結果顯示,從K562細胞成功擴增 4 300 bp的DAPK1基因ORF有7處突變,其中6處是同義突變,1處是基因的單鏈覈苷痠多態性;DAPK1基因的ORF剋隆到真覈錶達載體pcDNA3.1(+),轉化到Raji細胞;轉染48 h後,可以檢測到DAPK1的錶達,併可以觀察到細胞髮生凋亡.結論:大片段的基因可以採用RT-PCR法直接剋隆,採用常規的轉染技術可以將大片段基因轉染到宿主細胞;成功剋隆具有活性功能DAPK1基因ORF,過錶達的DAPK1基因可以誘導Raji細胞凋亡.
목적:탐토사망상관단백격매(DAPK1)재종류적형성、전이중소기작용,극륭DAPK1기인적개방독마서렬(ORF).방법:근거GenBank제공적핵감산서렬,자행설계인물,용RT-PCR종K562세포중확증DAPK1기인적ORF;용질지체장pcDNA3.1(+)-DAPK1전염도Raji세포,Hoechst 33258염색관찰세포조망,MTT법관찰DAPK1기인대세포생존적영향.결과:DAPK1기인적ORF극륭도질립pMD18-T,측서감정;분석결과현시,종K562세포성공확증 4 300 bp적DAPK1기인ORF유7처돌변,기중6처시동의돌변,1처시기인적단련핵감산다태성;DAPK1기인적ORF극륭도진핵표체재체pcDNA3.1(+),전화도Raji세포;전염48 h후,가이검측도DAPK1적표체,병가이관찰도세포발생조망.결론:대편단적기인가이채용RT-PCR법직접극륭,채용상규적전염기술가이장대편단기인전염도숙주세포;성공극륭구유활성공능DAPK1기인ORF,과표체적DAPK1기인가이유도Raji세포조망.
