中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2008年
4期
360-364
,共5页
王志力%王亚军%谢忠奎%郭志鸿%张玉宝
王誌力%王亞軍%謝忠奎%郭誌鴻%張玉寶
왕지력%왕아군%사충규%곽지홍%장옥보
Eg95(TP)基因序列%霍乱毒素B亚单位%融合基因%原核表达
Eg95(TP)基因序列%霍亂毒素B亞單位%融閤基因%原覈錶達
Eg95(TP)기인서렬%곽란독소B아단위%융합기인%원핵표체
目的 构建CTxB-Eg95(TP)融合基因原核表达载体,并诱导表达CTxB-Eg95(TP)融合蛋白.方法 采用PCR技术分别克隆CTxB基因和141bp的Eg95基因片段序列Eg95(TP)并鉴定.分别将两个基因片段定向克隆到大肠杆菌表达载体pET28a(+)中,构建pET-CTxB-Eg95(TP)重组质粒.将鉴定为阳性的重组质粒转化E.Coli BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后,进行SDS-PAGE电泳鉴定.结果 测序结果表明已成功构建CTxB-Eg95(TP) 融合基因的原核表达载体,SDS-PAGE电泳结果显示,转染pET-CTxB-Eg95(TP)的E.Coli BL21(DE3)菌经IPTG诱导可表达大小约23.5kDa的特异蛋白条带,与预期结果一致.结论 CTxB-Eg95(TP) 融合基因获得了高水平的表达,为Eg95的表位研究和应用于口服疫苗奠定了基础.
目的 構建CTxB-Eg95(TP)融閤基因原覈錶達載體,併誘導錶達CTxB-Eg95(TP)融閤蛋白.方法 採用PCR技術分彆剋隆CTxB基因和141bp的Eg95基因片段序列Eg95(TP)併鑒定.分彆將兩箇基因片段定嚮剋隆到大腸桿菌錶達載體pET28a(+)中,構建pET-CTxB-Eg95(TP)重組質粒.將鑒定為暘性的重組質粒轉化E.Coli BL21(DE3)感受態細胞,經IPTG誘導後,進行SDS-PAGE電泳鑒定.結果 測序結果錶明已成功構建CTxB-Eg95(TP) 融閤基因的原覈錶達載體,SDS-PAGE電泳結果顯示,轉染pET-CTxB-Eg95(TP)的E.Coli BL21(DE3)菌經IPTG誘導可錶達大小約23.5kDa的特異蛋白條帶,與預期結果一緻.結論 CTxB-Eg95(TP) 融閤基因穫得瞭高水平的錶達,為Eg95的錶位研究和應用于口服疫苗奠定瞭基礎.
목적 구건CTxB-Eg95(TP)융합기인원핵표체재체,병유도표체CTxB-Eg95(TP)융합단백.방법 채용PCR기술분별극륭CTxB기인화141bp적Eg95기인편단서렬Eg95(TP)병감정.분별장량개기인편단정향극륭도대장간균표체재체pET28a(+)중,구건pET-CTxB-Eg95(TP)중조질립.장감정위양성적중조질립전화E.Coli BL21(DE3)감수태세포,경IPTG유도후,진행SDS-PAGE전영감정.결과 측서결과표명이성공구건CTxB-Eg95(TP) 융합기인적원핵표체재체,SDS-PAGE전영결과현시,전염pET-CTxB-Eg95(TP)적E.Coli BL21(DE3)균경IPTG유도가표체대소약23.5kDa적특이단백조대,여예기결과일치.결론 CTxB-Eg95(TP) 융합기인획득료고수평적표체,위Eg95적표위연구화응용우구복역묘전정료기출.
