浙江大学学报（农业与生命科学版）
浙江大學學報（農業與生命科學版）
절강대학학보（농업여생명과학판）
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY(AGRICULTURE & LIFE SCIENCES)
2008年
2期
137-142
,共6页
王华新%曹家树%向珣%余小林%叶纨芝
王華新%曹傢樹%嚮珣%餘小林%葉紈芝
왕화신%조가수%향순%여소림%협환지
pBI121质粒%植物表达载体%转基因植株%鉴定方法
pBI121質粒%植物錶達載體%轉基因植株%鑒定方法
pBI121질립%식물표체재체%전기인식주%감정방법
以双元质粒pBI121为基础分别构建正义、反义和RNA干涉(RNAi)植物表达载体根据pBI121质粒多克隆位点两侧的DNA序列设计1对通用引物,以表达栽体的重组质粒DNA为模板进行PCR扩增,使用限制性内切酶BamH Ⅰ酶切PCR产物以验证扩增条带的真实性,从而可以快速鉴定pBI121表达栽体的重组克隆这种方法也可用于快速鉴定上述表达载体的转基因植株,其检测结果与常规鉴定方法完全一致此外,可以根据需要对表达载体的阳性PCR扩增产物进行测序,测序结果能够精确地显示出重组pBI121表达栽体中目的片段的插入方向以及插入序列是否出现碱基突变本研究为各种pBI121表达载体及其转基因植株的鉴定提供了一种快速、有效的方法
以雙元質粒pBI121為基礎分彆構建正義、反義和RNA榦涉(RNAi)植物錶達載體根據pBI121質粒多剋隆位點兩側的DNA序列設計1對通用引物,以錶達栽體的重組質粒DNA為模闆進行PCR擴增,使用限製性內切酶BamH Ⅰ酶切PCR產物以驗證擴增條帶的真實性,從而可以快速鑒定pBI121錶達栽體的重組剋隆這種方法也可用于快速鑒定上述錶達載體的轉基因植株,其檢測結果與常規鑒定方法完全一緻此外,可以根據需要對錶達載體的暘性PCR擴增產物進行測序,測序結果能夠精確地顯示齣重組pBI121錶達栽體中目的片段的插入方嚮以及插入序列是否齣現堿基突變本研究為各種pBI121錶達載體及其轉基因植株的鑒定提供瞭一種快速、有效的方法
이쌍원질립pBI121위기출분별구건정의、반의화RNA간섭(RNAi)식물표체재체근거pBI121질립다극륭위점량측적DNA서렬설계1대통용인물,이표체재체적중조질립DNA위모판진행PCR확증,사용한제성내절매BamH Ⅰ매절PCR산물이험증확증조대적진실성,종이가이쾌속감정pBI121표체재체적중조극륭저충방법야가용우쾌속감정상술표체재체적전기인식주,기검측결과여상규감정방법완전일치차외,가이근거수요대표체재체적양성PCR확증산물진행측서,측서결과능구정학지현시출중조pBI121표체재체중목적편단적삽입방향이급삽입서렬시부출현감기돌변본연구위각충pBI121표체재체급기전기인식주적감정제공료일충쾌속、유효적방법
