上海医学
上海醫學
상해의학
SHANGHAI MEDICAL JOURNAL
2008年
6期
417-421,封4
,共6页
李子龙%孙英慧%王力宁%任青%梁再赋%马健飞%冯江敏%周希静
李子龍%孫英慧%王力寧%任青%樑再賦%馬健飛%馮江敏%週希靜
리자룡%손영혜%왕력저%임청%량재부%마건비%풍강민%주희정
3-磷酸甘油醛脱氢酶%修饰蛋白%氨基酸测序%肾小管坏死%自由基
3-燐痠甘油醛脫氫酶%脩飾蛋白%氨基痠測序%腎小管壞死%自由基
3-린산감유철탈경매%수식단백%안기산측서%신소관배사%자유기
目的 通过分离、纯化、鉴定及蛋白质氨基酸测序3-磷酸甘油醛脱氢酶(G3PD)修饰蛋白(MP),观察庆大霉素诱发大鼠急性肾小管坏死(ATN)时, MP抗自由基损伤及对肾小管上皮细胞的修复作用.方法 采用Western印迹法及间接免疫荧光检测等方法对MP进行鉴定分析.纯化的MP以氨基酸自动分析仪测定氨基酸序列.将SD雄性大鼠随机分成正常对照组(腹膜内注射0.9%氯化钠溶液2mL-/d×7d+0.9%氯化钠溶液2mL/dX4d)、阴性对照组(腹膜内注射庆大霉素140mg·kg-1·d-1×7d+0.9% 钠溶液2mL/d×14d)、阳性对照组(腹膜内注射庆大霉素140mg·kg-1·d-1×7d+表皮生长因子 20μg·kg-1·d-1×14d)及实验组(腹膜内注射庆大霉素140mg·kg-1·d-1×7d+MP 250μg·kg-1·d-1×14d).应用MP观察7和14d的ATN大鼠模型血清及肾组织中脂质过氧化物(LPO)、还原型谷光苷肽(GSH).及一氧化氮(NO)水平的动态变化.通过光学显微镜、电子显微镜及免疫组织化学等形态学方法,观察MP修复ATN时大鼠肾小管上皮细胞的组织形态学及细胞间黏附因子-1(ICAM-1)表达的变化.同时测定血肌酐(SCr)水平.结果 间接免疫荧光法证实, MP位于细胞质内,且钾浓度为3.2mmol/L条件下的荧光强度明显强于钾浓度为5.4mmol/L时.MP由25个氨基酸残基组成.实验组的血清及肾皮质匀浆中LPO、NO水平均较阴性对照组明显下降(P值均<0.01), GSH明显上升(P值均<0.01).MP组肾脏病理改变比模型组明显减轻,同时SCr下降(P<0.01);实验组的ICAM-1表达较阴性对照组下调.结论 自由基积极参与ATN肾小管上皮细胞损伤, MP能够抑制ATN大鼠血清及肾组织中LPO、NO水平的升高及GSH水平的下降.MP具有抗自由基损伤及修复肾小管上皮细胞的作用.
目的 通過分離、純化、鑒定及蛋白質氨基痠測序3-燐痠甘油醛脫氫酶(G3PD)脩飾蛋白(MP),觀察慶大黴素誘髮大鼠急性腎小管壞死(ATN)時, MP抗自由基損傷及對腎小管上皮細胞的脩複作用.方法 採用Western印跡法及間接免疫熒光檢測等方法對MP進行鑒定分析.純化的MP以氨基痠自動分析儀測定氨基痠序列.將SD雄性大鼠隨機分成正常對照組(腹膜內註射0.9%氯化鈉溶液2mL-/d×7d+0.9%氯化鈉溶液2mL/dX4d)、陰性對照組(腹膜內註射慶大黴素140mg·kg-1·d-1×7d+0.9% 鈉溶液2mL/d×14d)、暘性對照組(腹膜內註射慶大黴素140mg·kg-1·d-1×7d+錶皮生長因子 20μg·kg-1·d-1×14d)及實驗組(腹膜內註射慶大黴素140mg·kg-1·d-1×7d+MP 250μg·kg-1·d-1×14d).應用MP觀察7和14d的ATN大鼠模型血清及腎組織中脂質過氧化物(LPO)、還原型穀光苷肽(GSH).及一氧化氮(NO)水平的動態變化.通過光學顯微鏡、電子顯微鏡及免疫組織化學等形態學方法,觀察MP脩複ATN時大鼠腎小管上皮細胞的組織形態學及細胞間黏附因子-1(ICAM-1)錶達的變化.同時測定血肌酐(SCr)水平.結果 間接免疫熒光法證實, MP位于細胞質內,且鉀濃度為3.2mmol/L條件下的熒光彊度明顯彊于鉀濃度為5.4mmol/L時.MP由25箇氨基痠殘基組成.實驗組的血清及腎皮質勻漿中LPO、NO水平均較陰性對照組明顯下降(P值均<0.01), GSH明顯上升(P值均<0.01).MP組腎髒病理改變比模型組明顯減輕,同時SCr下降(P<0.01);實驗組的ICAM-1錶達較陰性對照組下調.結論 自由基積極參與ATN腎小管上皮細胞損傷, MP能夠抑製ATN大鼠血清及腎組織中LPO、NO水平的升高及GSH水平的下降.MP具有抗自由基損傷及脩複腎小管上皮細胞的作用.
목적 통과분리、순화、감정급단백질안기산측서3-린산감유철탈경매(G3PD)수식단백(MP),관찰경대매소유발대서급성신소관배사(ATN)시, MP항자유기손상급대신소관상피세포적수복작용.방법 채용Western인적법급간접면역형광검측등방법대MP진행감정분석.순화적MP이안기산자동분석의측정안기산서렬.장SD웅성대서수궤분성정상대조조(복막내주사0.9%록화납용액2mL-/d×7d+0.9%록화납용액2mL/dX4d)、음성대조조(복막내주사경대매소140mg·kg-1·d-1×7d+0.9% 납용액2mL/d×14d)、양성대조조(복막내주사경대매소140mg·kg-1·d-1×7d+표피생장인자 20μg·kg-1·d-1×14d)급실험조(복막내주사경대매소140mg·kg-1·d-1×7d+MP 250μg·kg-1·d-1×14d).응용MP관찰7화14d적ATN대서모형혈청급신조직중지질과양화물(LPO)、환원형곡광감태(GSH).급일양화담(NO)수평적동태변화.통과광학현미경、전자현미경급면역조직화학등형태학방법,관찰MP수복ATN시대서신소관상피세포적조직형태학급세포간점부인자-1(ICAM-1)표체적변화.동시측정혈기항(SCr)수평.결과 간접면역형광법증실, MP위우세포질내,차갑농도위3.2mmol/L조건하적형광강도명현강우갑농도위5.4mmol/L시.MP유25개안기산잔기조성.실험조적혈청급신피질균장중LPO、NO수평균교음성대조조명현하강(P치균<0.01), GSH명현상승(P치균<0.01).MP조신장병리개변비모형조명현감경,동시SCr하강(P<0.01);실험조적ICAM-1표체교음성대조조하조.결론 자유기적겁삼여ATN신소관상피세포손상, MP능구억제ATN대서혈청급신조직중LPO、NO수평적승고급GSH수평적하강.MP구유항자유기손상급수복신소관상피세포적작용.
