中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2008年
7期
584-587
,共4页
宋玉靖%樊卫平%王宏伟%张帆%范国权
宋玉靖%樊衛平%王宏偉%張帆%範國權
송옥정%번위평%왕굉위%장범%범국권
人巨细胞病毒%pp65基因%原核表达
人巨細胞病毒%pp65基因%原覈錶達
인거세포병독%pp65기인%원핵표체
目的 构建人巨细胞病毒(HCMV)pp65基因片段(363～505位氨基酸)的原核表达质粒,并鉴定所表达蛋白的反应原性.方法 以含有HCMVpp65全长基因的pGEM-T-pp65质粒为模板,PCR扩增pp65基因第1 087～1 515位核苷酸片段,酶切后插入pET-21a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3).经IPTG诱导表达,纯化后进行Western blot鉴定.结果 酶切分析和测序证明原核表达质粒pET-21a(+)-pp65构建正确.表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在,以1.0mmol/L IPTG诱导5 h,目的 蛋白的表达量最高.纯化后的蛋白具有良好的反应原性.结论 已成功构建了HCMV pp65基因片段原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达了融合蛋白.
目的 構建人巨細胞病毒(HCMV)pp65基因片段(363～505位氨基痠)的原覈錶達質粒,併鑒定所錶達蛋白的反應原性.方法 以含有HCMVpp65全長基因的pGEM-T-pp65質粒為模闆,PCR擴增pp65基因第1 087～1 515位覈苷痠片段,酶切後插入pET-21a(+)載體,轉化大腸桿菌BL21(DE3).經IPTG誘導錶達,純化後進行Western blot鑒定.結果 酶切分析和測序證明原覈錶達質粒pET-21a(+)-pp65構建正確.錶達的融閤蛋白主要以包涵體形式存在,以1.0mmol/L IPTG誘導5 h,目的 蛋白的錶達量最高.純化後的蛋白具有良好的反應原性.結論 已成功構建瞭HCMV pp65基因片段原覈錶達質粒,併在大腸桿菌中錶達瞭融閤蛋白.
목적 구건인거세포병독(HCMV)pp65기인편단(363～505위안기산)적원핵표체질립,병감정소표체단백적반응원성.방법 이함유HCMVpp65전장기인적pGEM-T-pp65질립위모판,PCR확증pp65기인제1 087～1 515위핵감산편단,매절후삽입pET-21a(+)재체,전화대장간균BL21(DE3).경IPTG유도표체,순화후진행Western blot감정.결과 매절분석화측서증명원핵표체질립pET-21a(+)-pp65구건정학.표체적융합단백주요이포함체형식존재,이1.0mmol/L IPTG유도5 h,목적 단백적표체량최고.순화후적단백구유량호적반응원성.결론 이성공구건료HCMV pp65기인편단원핵표체질립,병재대장간균중표체료융합단백.
