畜禽业
畜禽業
축금업
2008年
3期
32-35
,共4页
岳丰雄%崔尚金%冉多良%张超范%周盛华%戚亭
嶽豐雄%崔尚金%冉多良%張超範%週盛華%慼亭
악봉웅%최상금%염다량%장초범%주성화%척정
多重PCR%RT-PCR%PRRSV%CSFV
多重PCR%RT-PCR%PRRSV%CSFV
다중PCR%RT-PCR%PRRSV%CSFV
建立了1种一步法RT-PCR用于同时检测典型猪瘟病毒(SCFV)和猪繁殖呼吸道综合征病毒(PRRSV)的多重PCR诊断方法(Multiplex PCR,mPCR).根据Genbank上公布的CSFV、PRRSV基因组全序列及部分序列.借助DNAStar和Oligo 6.0基因序列和引物设计软件,设计2对特异性引物分别用于扩增CFSV、PRRSV病毒777bp和434 bp的目的片断.该mPCR由RT反应和PCR反应构成.将病毒核酸连接到PMD18-T载体,提取质粒后,以10倍进行倍比稀释,取每个稀释度的病毒核酸进行mPCR反应.对CSFV、PRRSV的最低检测量分别为8.5 Pg、8.3×10-2Pg.以ZPCV2、PCV1、PPV、PRV、SIV、E.coil和双蒸水为模板进行mPCR反应,扩增结果均为阴性.表明该mPCR具有较好的特异性.对临床样品的检测表明,本研究建立的mPCR诊断方法能够对CSFV和PRRSV进行快速的诊断,同时对CSFV、PRRSV在猪群中的流行病学调查也具有十分重要的意义.
建立瞭1種一步法RT-PCR用于同時檢測典型豬瘟病毒(SCFV)和豬繁殖呼吸道綜閤徵病毒(PRRSV)的多重PCR診斷方法(Multiplex PCR,mPCR).根據Genbank上公佈的CSFV、PRRSV基因組全序列及部分序列.藉助DNAStar和Oligo 6.0基因序列和引物設計軟件,設計2對特異性引物分彆用于擴增CFSV、PRRSV病毒777bp和434 bp的目的片斷.該mPCR由RT反應和PCR反應構成.將病毒覈痠連接到PMD18-T載體,提取質粒後,以10倍進行倍比稀釋,取每箇稀釋度的病毒覈痠進行mPCR反應.對CSFV、PRRSV的最低檢測量分彆為8.5 Pg、8.3×10-2Pg.以ZPCV2、PCV1、PPV、PRV、SIV、E.coil和雙蒸水為模闆進行mPCR反應,擴增結果均為陰性.錶明該mPCR具有較好的特異性.對臨床樣品的檢測錶明,本研究建立的mPCR診斷方法能夠對CSFV和PRRSV進行快速的診斷,同時對CSFV、PRRSV在豬群中的流行病學調查也具有十分重要的意義.
건립료1충일보법RT-PCR용우동시검측전형저온병독(SCFV)화저번식호흡도종합정병독(PRRSV)적다중PCR진단방법(Multiplex PCR,mPCR).근거Genbank상공포적CSFV、PRRSV기인조전서렬급부분서렬.차조DNAStar화Oligo 6.0기인서렬화인물설계연건,설계2대특이성인물분별용우확증CFSV、PRRSV병독777bp화434 bp적목적편단.해mPCR유RT반응화PCR반응구성.장병독핵산련접도PMD18-T재체,제취질립후,이10배진행배비희석,취매개희석도적병독핵산진행mPCR반응.대CSFV、PRRSV적최저검측량분별위8.5 Pg、8.3×10-2Pg.이ZPCV2、PCV1、PPV、PRV、SIV、E.coil화쌍증수위모판진행mPCR반응,확증결과균위음성.표명해mPCR구유교호적특이성.대림상양품적검측표명,본연구건립적mPCR진단방법능구대CSFV화PRRSV진행쾌속적진단,동시대CSFV、PRRSV재저군중적류행병학조사야구유십분중요적의의.
