CAJ | 학술논문

利用RT-PCR技术获得病毒性神经坏死病毒0603株的衣壳蛋白基因,将其插入到杆状病毒Bac-To-Bac表达系统的pFastBacI质粒中,构建了pFastBac-cp质粒.转化DH10Bac大肠杆菌后获得重组穿梭载体Bacmid-cp,脂质体介导将其转染Sf9细胞产生有感染性的重组杆状病毒AcNPV-cp.利用AcNPV-cp感染Sf9细胞后,SDS-PAGE分析可见大小约为37 ku的特异性蛋白带,Western-blotting分析发现,其可以与病毒性神经坏死病毒阳性血清反应出现特异性的杂交带.试验结果表明,AcNPV-cp在Sf9细胞中成功地表达了病毒性神经坏死病毒的衣壳蛋白,其具有良好的免疫学活性.负染电镜观察发现,CP蛋白可自行装配成病毒样颗粒,其大小形态类似于病毒性神经坏死病毒.制备超薄切片后电镜观察发现,CP蛋白自行装配成的病毒样颗粒呈晶格状排列在细胞质中.为研制有效防控鱼类病毒性神经坏死病的新型颗粒性疫苗奠定了基础.
이용RT-PCR기술획득병독성신경배사병독0603주적의각단백기인,장기삽입도간상병독Bac-To-Bac표체계통적pFastBacI질립중,구건료pFastBac-cp질립.전화DH10Bac대장간균후획득중조천사재체Bacmid-cp,지질체개도장기전염Sf9세포산생유감염성적중조간상병독AcNPV-cp.이용AcNPV-cp감염Sf9세포후,SDS-PAGE분석가견대소약위37 ku적특이성단백대,Western-blotting분석발현,기가이여병독성신경배사병독양성혈청반응출현특이성적잡교대.시험결과표명,AcNPV-cp재Sf9세포중성공지표체료병독성신경배사병독적의각단백,기구유량호적면역학활성.부염전경관찰발현,CP단백가자행장배성병독양과립,기대소형태유사우병독성신경배사병독.제비초박절편후전경관찰발현,CP단백자행장배성적병독양과립정정격상배렬재세포질중.위연제유효방공어류병독성신경배사병적신형과립성역묘전정료기출.